| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-23页 |
| 1.1 前言 | 第12页 |
| 1.2 Hfq的发现及其主要特征 | 第12-14页 |
| 1.3 Hfq参与生理调控的分子机制 | 第14-17页 |
| 1.3.1 Hfq参与靶标基因的转录后调控 | 第14页 |
| 1.3.2 Hfq介导sRNA与rpoS mRNA的相互作用 | 第14-16页 |
| 1.3.3 Hfq蛋白自身表达活性的调控 | 第16-17页 |
| 1.4 hfq参与多种生理功能 | 第17-22页 |
| 1.4.1 hfq参与细菌的生长及胁迫抗性 | 第17-18页 |
| 1.4.2 hfq影响细菌的群体感应 | 第18-20页 |
| 1.4.3 hfq影响细菌致病性 | 第20-21页 |
| 1.4.4 hfq影响细菌生物固氮 | 第21-22页 |
| 1.5 立题依据 | 第22-23页 |
| 第二章 施氏假单胞菌A1501 中hfq突变株和回补菌株的构建 | 第23-37页 |
| 2.1 材料 | 第23-25页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第23页 |
| 2.1.2 培养基 | 第23-24页 |
| 2.1.3 酶和化学试剂 | 第24-25页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第25页 |
| 2.2 方法 | 第25-30页 |
| 2.2.1 细菌质粒的提取 | 第25-26页 |
| 2.2.2 细菌基因组的提取 | 第26-27页 |
| 2.2.3 引物设计 | 第27页 |
| 2.2.4 PCR产物的纯化 | 第27-28页 |
| 2.2.5 酶切及连接 | 第28页 |
| 2.2.6 连接产物的转化 | 第28页 |
| 2.2.7 三亲本结合实验 | 第28-29页 |
| 2.2.8 hfq转录分析 | 第29-30页 |
| 2.3 结果分析 | 第30-36页 |
| 2.3.1 hfq在染色体上的分布 | 第30-32页 |
| 2.3.3 hfq非极性突变株的构建 | 第32-36页 |
| 2.4 讨论 | 第36-37页 |
| 第三章 hfq突变株生理生化表型的鉴定 | 第37-61页 |
| 3.1 材料 | 第37-41页 |
| 3.1.1 菌株和质粒 | 第37页 |
| 3.1.2 培养基 | 第37-38页 |
| 3.1.3 酶和化学试剂 | 第38页 |
| 3.1.4 主要仪器 | 第38-39页 |
| 3.1.5 PCR引物设计 | 第39-41页 |
| 3.2 方法 | 第41-48页 |
| 3.2.1 生长曲线的测定 | 第41-42页 |
| 3.2.2 固氮酶活的测定 | 第42页 |
| 3.2.3 Western blot检测固氮调控蛋白表达水平 | 第42-44页 |
| 3.2.4 逆境胁迫实验 | 第44页 |
| 3.2.5 反硝化能力的测定 | 第44-45页 |
| 3.2.6 趋化运动实验 | 第45页 |
| 3.2.7 生物膜的测定 | 第45-46页 |
| 3.2.8 Biolog分析野生型与突变株对碳源的利用情况 | 第46页 |
| 3.2.9 RNA的提取 | 第46-48页 |
| 3.2.10 荧光实时定量PCR反应 | 第48页 |
| 3.3 结果分析 | 第48-59页 |
| 3.3.1 系统发育分析 | 第48-49页 |
| 3.3.2 hfq突变株的生长曲线 | 第49-50页 |
| 3.3.3 hfq突变对固氮酶活的影响 | 第50-51页 |
| 3.3.4 hfq突变对固氮相关基因的影响 | 第51页 |
| 3.3.5 hfq突变对固氮调控蛋白表达水平的影响 | 第51-52页 |
| 3.3.6 hfq突变对胁迫抗性的影响 | 第52-54页 |
| 3.3.7 hfq突变对反硝化能力的影响 | 第54-56页 |
| 3.3.8 hfq突变和回补菌株对细菌运动能力的影响 | 第56-57页 |
| 3.3.9 生物膜的测定 | 第57-58页 |
| 3.3.10 Biolog分析hfq突变对碳源的利用情况的影响 | 第58-59页 |
| 3.4 讨论 | 第59-61页 |
| 第四章 RpoS激活hfq表达的研究 | 第61-76页 |
| 4.1 材料 | 第61-63页 |
| 4.1.1 菌株和质粒 | 第61页 |
| 4.1.2 培养基 | 第61-62页 |
| 4.1.3 酶和化学试剂 | 第62页 |
| 4.1.4 主要仪器 | 第62页 |
| 4.1.5 常用溶液 | 第62-63页 |
| 4.2 方法 | 第63-68页 |
| 4.2.1 RpoS蛋白的表达纯化 | 第63-64页 |
| 4.2.2 SDS-PAGE电泳 | 第64-65页 |
| 4.2.3 凝胶阻滞实验（EMSA） | 第65-66页 |
| 4.2.4 Hfq蛋白表达载体的构建 | 第66-68页 |
| 4.3 结果与分析 | 第68-74页 |
| 4.3.1 hfq上游区域分析 | 第68-69页 |
| 4.3.2 RpoS蛋白的纯化 | 第69-70页 |
| 4.3.3 凝胶阻滞实验分析蛋白与DNA的结合 | 第70页 |
| 4.3.4 RpoS蛋白与A1501 中hfq基因启动子的结合 | 第70-71页 |
| 4.3.5 Hfq蛋白表达载体的构建 | 第71-74页 |
| 4.3.6 Hfq蛋白表达与纯化 | 第74页 |
| 4.4 讨论 | 第74-76页 |
| 第五章 结论 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-85页 |
| 作者简历 | 第85-86页 |
| 致谢 | 第86页 |
