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栉孔扇贝Cf-dmrt4-like基因的克隆、表达及功能分析

摘要第1-7页
Abstract第7-14页
第一章 性别决定机制和性腺发育相关基因的研究进展第14-55页
 1 性别决定与性别分化第15-29页
   ·性别决定机制第16-19页
   ·环境与性别决定第19-22页
     ·温度第20-21页
     ·食物丰度第21页
     ·密度及光照第21-22页
     ·pH值第22页
   ·性别决定和性腺发育相关基因第22-29页
     ·Hox基因家族第23页
     ·Sox基因家族第23-26页
     ·其它基因第26-29页
 2 Dmrt基因研究进展第29-48页
   ·Dmrt基因序列特征及聚类分析第30-36页
     ·DM结构域序列特征分析第30-32页
     ·氨基酸序列特征分析第32-36页
     ·Dmrt基因的连锁关系分析第36页
   ·Dmrt基因的功能第36-47页
     ·Dmrt1第36-39页
     ·Dmrt2第39-40页
     ·Dmrt3第40-41页
     ·Dmrt4第41页
     ·Dmrt5第41-42页
     ·Dmrt6第42页
     ·Dmrt7和Dmrt8第42-47页
   ·无脊椎动物dmrt基因的研究进展第47-48页
 3 基因功能研究现状第48-53页
   ·RNA干扰策略第50-51页
   ·RNA干扰技术在水生生物中的应用第51-53页
 4 本研究的立项依据和研究意义第53-55页
第二章 栉孔扇贝(Chlamys farreri)dmrt家族基因的 DcNA克隆和序列特征分析第55-76页
 1 材料与方法第55-61页
   ·材料第55-56页
   ·方法第56-61页
     ·DH5a感受态细胞的制备第56页
     ·总RNA的提取和第一链cDNA的合成第56-58页
     ·cDNA第一链的合成第58页
     ·目的片段的PCR扩增第58页
     ·目的片段的克隆第58-59页
     ·基因全长cDNA序列的获得第59-61页
     ·目的基因的核酸序列特征及氨基酸序列相似性分析第61页
 2 结果第61-71页
   ·目的基因cDNA序列特征第61-66页
   ·选择性剪接(Alternative splicing)第66-68页
   ·序列比对及系统进化分析第68-71页
   ·栉孔扇贝CF-DMRT-LIKE蛋白三维结构第71页
 3 讨论第71-76页
   ·Dmrt基因的命名原则第71-72页
   ·选择性剪接第72-74页
   ·核定位信号序列第74-76页
第三章 栉孔扇贝(Chlamys farreri)dmrt基因的时空表达及Cf-dmrt4-like基因的发育表达图式第76-99页
 1 材料与方法第77-85页
   ·材料第77-78页
     ·成体组织第77页
     ·胚胎、幼虫、稚贝和幼贝第77-78页
     ·工具酶、试剂盒第78页
   ·方法第78-85页
     ·性腺组织学观察第78页
     ·Dmrt家族基因的时空表达分析第78-85页
       ·RT-PCR分析第79页
       ·相对定量qRT-PCR分析第79-80页
       ·原位杂交探针合成第80-82页
       ·组织原位杂交第82-84页
       ·整体原位杂交第84页
       ·稚贝整体原位杂交和组织学观察第84-85页
 2 结果第85-96页
   ·Cf-dmrt4-like基因的组织表达特征第85-86页
     ·Cf-dmrt4-like基因在胚胎和幼虫中的表达第85-86页
     ·原位杂交检测Cf-dmrt4-like基因在栉孔扇贝非性腺组织中的细胞学定位第86页
   ·Cf-dmrt4-like基因在不同发育周期性腺中的表达第86-92页
     ·Cf-dmrt4-like mRNA在发育周期性腺中的定量分析第88页
     ·Cf-dmrt4-like基因在栉孔扇贝性腺发育周期中的表达图式第88-92页
       ·性腺发育周期的组织学观察第88-90页
       ·Cf-dmrt4-like mRNA在性腺中的原位杂交分析第90-92页
   ·Cf-dmrt4-like基因的发育表达图式第92-96页
     ·Cf-dmrt4-lik基因在发育过程中的定量表达分析第92-93页
     ·Cf-dmrt4-like mRNA在栉孔扇贝发育中的原位杂交分析第93-96页
 3 讨论第96-99页
   ·Cf-dmrt4-like mRNA的母源合成和在发育中的作用第96-97页
   ·Cf-dmrt4-like mRNA在性腺中的表达第97-98页
   ·Cf-dmrt4-like基因广泛参与非性腺组织的发育第98-99页
第四章 栉孔扇贝Cf-dmrt4-like基因的RNA干扰尝试第99-108页
 1 材料和方法第99-103页
   ·材料第99-100页
     ·实验动物第99-100页
     ·试剂第100页
   ·方法第100-103页
     ·引物设计第100-101页
     ·dsRNA模板的制备第101页
     ·体外转录合成dsRNA第101-102页
     ·dsRNA的鉴定第102页
     ·dsRNA的注射和样品收集第102-103页
     ·总RNA的提取第103页
     ·cDNA第一链的合成第103页
     ·qRT-PCR检测干扰效果第103页
 2 结果第103-106页
   ·dsRNA的制备第103-104页
   ·dsRNA的鉴定第104-105页
   ·RNA干扰对栉孔扇贝Cf-dmrt4-like基因敲减的有效性分析第105-106页
 3 讨论第106-108页
总结第108-109页
参考文献第109-121页
发表和完成的论文第121-122页
致谢第122页

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