| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 第1章 绪论 | 第13-21页 |
| 1.1 本课题的研究目的与意义 | 第13-14页 |
| 1.2 国内外研究现状及动态分析 | 第14-15页 |
| 1.3 杆状病毒的研究 | 第15-18页 |
| 1.3.1 杆状病毒简介 | 第15页 |
| 1.3.2 杆状病毒的分类 | 第15页 |
| 1.3.3 杆状病毒的生活史 | 第15-16页 |
| 1.3.4 杆状病毒的膜融合蛋白 | 第16-18页 |
| 1.4 AcMNPV GP64胆固醇结合研究进展 | 第18页 |
| 1.5 本文主要研究内容 | 第18-21页 |
| 第2章 BmNPV GP64信号肽序列特性分析 | 第21-35页 |
| 2.1 材料与方法 | 第21-30页 |
| 2.1.1 材料与试剂 | 第21页 |
| 2.1.2 常用试剂和缓冲液的配制 | 第21-23页 |
| 2.1.3 BmNPV GP64信号肽预测及分析 | 第23-25页 |
| 2.1.4 引物设计 | 第25-26页 |
| 2.1.5 pFastBacDual重组载体的构建 | 第26页 |
| 2.1.6 Bac-to-Bac杆状病毒表达系统 | 第26-27页 |
| 2.1.7 DNA的细胞转染 | 第27-28页 |
| 2.1.8 SDS-PAGE | 第28-29页 |
| 2.1.9 Western-blot | 第29页 |
| 2.1.10 BmNPV病毒粒子的纯化及Western bolt检测 | 第29-30页 |
| 2.2 实验结果与分析 | 第30-33页 |
| 2.2.1 EGFP及E18-c-Myc-Tag-pro/gp64目的基因的克隆 | 第30页 |
| 2.2.2 重组载体的构建 | 第30-31页 |
| 2.2.3 重组杆状病毒Bacmid的构建 | 第31-32页 |
| 2.2.4 重组Bacmid转染BmN细胞情况 | 第32页 |
| 2.2.5 Western blot验证 | 第32-33页 |
| 2.3 讨论 | 第33-35页 |
| 第3章 BmNPV GP64缺失病毒的构建 | 第35-49页 |
| 3.1 实验材料与方法 | 第35-44页 |
| 3.1.1 实验质粒与菌株 | 第35页 |
| 3.1.2 实验试剂 | 第35-36页 |
| 3.1.3 实验室常用试剂和缓冲液的配制 | 第36-38页 |
| 3.1.4 实验仪器和设备 | 第38页 |
| 3.1.5 生物信息学分析软件 | 第38-39页 |
| 3.1.6 引物设计 | 第39-41页 |
| 3.1.7 1%琼脂糖凝胶的制备与电泳 | 第41页 |
| 3.1.8 目的片段的回收 | 第41-42页 |
| 3.1.9 感受态细胞的制备 | 第42页 |
| 3.1.10 DNA的转化 | 第42-43页 |
| 3.1.11 碱裂解法提取少量质粒DNA | 第43页 |
| 3.1.12 PCR法鉴定缺失病毒 | 第43-44页 |
| 3.1.13 甘油菌的制备与存菌 | 第44页 |
| 3.2 实验结果与分析 | 第44-47页 |
| 3.2.1 Red重组系统的构建 | 第44页 |
| 3.2.2 打靶DNA分子的获得 | 第44-45页 |
| 3.2.3 BmNPV gp64缺失菌株单克隆的获得 | 第45页 |
| 3.2.4 PCR法鉴定缺失病毒 | 第45-47页 |
| 3.3 讨论 | 第47-49页 |
| 第4章 BmNPV GP64 CRACs分析及与胆固醇互作探究 | 第49-57页 |
| 4.1 实验材料与方法 | 第49-51页 |
| 4.1.1 实验材料与试剂 | 第49页 |
| 4.1.2 引物设计 | 第49-50页 |
| 4.1.3 AcMNPV与BmNPV膜融合蛋白GP64结构示意图 | 第50页 |
| 4.1.4 PCR扩增gp64序列及系列点突变gp64序列 | 第50-51页 |
| 4.1.5 BmNPV gp64缺失病毒的构建及重组杆状病毒Bacmid的构建 | 第51页 |
| 4.1.6 重组杆状病毒Bacmid转染BmN细胞 | 第51页 |
| 4.2 实验结果与分析 | 第51-55页 |
| 4.2.1 BmNPV gp64及点突变序列的TA克隆 | 第51-53页 |
| 4.2.2 BmNPV GP64膜蛋白晶体结构的三维展示 | 第53页 |
| 4.2.3 Bac-to-Bac重组供体质粒的构建及重组杆状病毒Bacmid的构建 | 第53-54页 |
| 4.2.4 重组杆状病毒Bacmid转染BmN细胞 | 第54-55页 |
| 4.3 讨论 | 第55-57页 |
| 结论 | 第57-59页 |
| 参考文献 | 第59-65页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第65-66页 |
| 致谢 | 第66页 |
