| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6页 |
| ABBREVIATIONS | 第15-18页 |
| CHAPTER 1 LITERATURE REVIEW | 第18-29页 |
| 1.1 GENERAL INTRODUCTION | 第18-27页 |
| 1.1.1 ORIGIN OF SATELLITE CELLS | 第19页 |
| 1.1.2 SATELLITE CELLS FUNCTION | 第19-21页 |
| 1.1.3 MYOSTATIN | 第21-22页 |
| 1.1.4 ROLES OF THE MYOGENIC REGULATORS IN SATELLITE CELL BIOLOGY | 第22-23页 |
| 1.1.5 MECHANISM OF MYOSTATIN FUNCTION IN SATELLITE CELL BIOLOGY | 第23-24页 |
| 1.1.6 TRANSGENE TECHNOLOGY | 第24页 |
| 1.1.7 ZINC FINGER NUCLEASES | 第24-27页 |
| 1.2 SUMMARY | 第27-28页 |
| 1.3 OBJECTIVES | 第28-29页 |
| CHAPTER 2 ISOLA-TION AND CULTURE OF SHEEP FETAL MUSCLE SATELLITE CELLS | 第29-39页 |
| 2.1 ABSTRACT | 第29页 |
| 2.2 INTRODUCTION | 第29-30页 |
| 2.3 MATERIAL AND METHODS | 第30-34页 |
| 2.3.1 CULTURE MEDIUM AND SOLUTION | 第30页 |
| 2.3.2 PRIMARY SKELETAL MUSCLE SATELLITE CELLS GENERATION | 第30-31页 |
| MECHANICAL TECHNIQUES | 第31页 |
| ENZYMATIC DIGESTION | 第31页 |
| 2.3.3 CULTURE OF SHEEP FETAL MUSCLE SATELLITE CELLS | 第31-32页 |
| CELL THAWING PROCEDURE | 第32页 |
| CELL PASSAGE PROCEDURE | 第32页 |
| DETERMINING CELL DENSITY AND VIABILITY | 第32页 |
| CELL FREEZING PROCEDURE | 第32页 |
| 2.3.4 GIEMSA STAINING | 第32-33页 |
| 2.3.5 RNA ISOLATION AND RT-PCR ANALYSIS | 第33页 |
| 2.3.6 TRANSFECTION OF PSC | 第33页 |
| 2.3.7 SINGLE CELL SORTING USING FACS | 第33-34页 |
| 2.3.8 SINGLE-CELL CLONING | 第34页 |
| 2.4 RESULTS | 第34-38页 |
| 2.4.1 CULTURE OF SHEEP FETUS MUSCLE CELLS | 第34-35页 |
| 2.4.2 GIEMSA STAINING | 第35-36页 |
| 2.4.3 PCR RESULTS | 第36-37页 |
| 2.4.4 ANALYSIS OF TRANSGENIC CLONES DERIVED FROM SINGLE CELL CLONING | 第37-38页 |
| 2.5 DISCUTION | 第38页 |
| 2.6 CONCLUSION | 第38-39页 |
| CHAPTER 3 SEX DETERMINATION OF OVINE PRIMARY SATELLITE CELLS USING SIMPLE ANDDUPLEX POLYMERASE CHAIN REACTION | 第39-54页 |
| 3.1 ABSTRACT | 第39页 |
| 3.2 INTRODUCTION | 第39-41页 |
| 3.3 MATERIAL AND METHODS | 第41-47页 |
| ENZYMES, CHEMICALS, PLASMIDS, STRAINS AND MEDIA | 第41页 |
| 3.3.1 BLOOD SAMPLES PREPARATION | 第41页 |
| 3.3.2 PRIMARY SATELLITE CELLS GENERATION | 第41页 |
| 3.3.3 DNA EXTRACTION FROM SHEEP BLOOD | 第41-42页 |
| 3.3.4 PRIMER DESIGN | 第42-43页 |
| 3.3.5 CONDITION OF PCR AND DETECTION OF AMPLIFIED PRODUCT | 第43-44页 |
| 3.3.6 SOUTHERN BLOT ANALYSIS | 第44-47页 |
| 3.4 RESULTS | 第47-52页 |
| 3.4.1 PCR AMPLIFICATION | 第47-49页 |
| 3.4.2 SEX DETERMINATION | 第49-50页 |
| 3.4.3 SOUTHERN BLOT OF HMG BOX | 第50-52页 |
| 3.5 DISCUSSION | 第52-53页 |
| 3.6 CONCLUSION | 第53-54页 |
| CHAPTER 4 MYOSTATIN KNOCKOUT USING ZINC-FINGER NUCLEASES PROMOTESPROLIFERATION OF OVINE PRIMARY SATELLITE CELLS IN VITRO | 第54-95页 |
| 4.1 ABSTRACT | 第54页 |
| 4.2 INTRODUCTION | 第54-55页 |
| 4.3 MATERIAL AND METHODS | 第55-72页 |
| 4.3.1 ZINC-FINGER NUCLEASE DESIGN | 第55-56页 |
| 4.3.2 MYOSTATIN ZFN DONOR VECTOR CONSTRUCTION | 第56-58页 |
| 4.3.3 PREPARATION AND CULTURE OF PRMARY SATELLITE CELLS | 第58页 |
| 4.3.4 TRANSFECTION OF PRIMARY SATELLITE CELLS | 第58-61页 |
| PROCEDURES FOR DELIVERY OF ZFNS AND DONOR VECTOR FOR GENEKNOCKOUT | 第59-60页 |
| LIPID-BASED TRANSFECTION | 第60-61页 |
| 4.3.5 HAR-VESTING GENOMIC DNA AFTER DELIVERY OF ZFNS | 第61页 |
| THE QUALITY OF THE GENOMIC DNA TO BE AMPLIFIED | 第61页 |
| 4.3.6 SURVEYOR MUTATION DETECTION ASSAY(DNA CLEAVAGE ASSAY) | 第61-64页 |
| 4.3.7 FIACS ANALYSIS OF GFP EXPRESSION AND SINGLE CELL SORTING | 第64-65页 |
| 4.3.8 SINGLE CELL CLONING | 第65-66页 |
| 4.3.9 CLONAL ANALYSIS OF KNOCKOUT CELLS BY SEQUENCE ANALYSIS | 第66页 |
| 4.3.10 PRIMARY SATELLITE CELLS GROWTH CURVE | 第66页 |
| 4.3.11 FLOW CYTOME TRY ANALYSIS OF THE CELL CYCLE | 第66-67页 |
| 4.3.12 SDS- POLYACRYLAMIDE GEL ELECTROPHORESIS(PAGE) | 第67页 |
| 4.3.13 PROTEIN GEL STAINING | 第67-68页 |
| 4.3.14 WESTERN BLOT | 第68-69页 |
| 4.3.15 RNA ISOLATION AND RT-PCR | 第69-70页 |
| 4.3.16 REAL-TIME QUANTITATIVE PCR ANALYSIS | 第70页 |
| 4.3.17 PROLIFERATION ASSAY | 第70-71页 |
| 4.3.18 CELL STAINING AND DETERMINATION OF FUSION PERCENTAGE | 第71-72页 |
| 4.3.19 STATISTICAL ANALYSIS | 第72页 |
| 4.4 RESULTS | 第72-92页 |
| 4.4.1 CONSTRUCTION OF DONOR VECTOR | 第72-73页 |
| 4.4.2 GENE TARGET EFFICIENCY | 第73-74页 |
| 4.4.4 SCREENING AND ANALYSIS OF KNOCKOUT COLONY | 第74-75页 |
| 4.4.5 PROTEIN GEL STAINING | 第75-80页 |
| 4.4.6 MYOSTATIN MRNA AND PROTEIN EXPRESSION ANALYSIS | 第80-81页 |
| 4.4.7 EFFECT OF MYOSTATIN KNOCKOUT ON SATELLITE CELL CYCLEPROGRESSION | 第81-82页 |
| 4.4.8 GROWTH CURVE OF PRIMARY SATELLITE CELLS | 第82页 |
| 4.4.9 INCREASED PROLIFERATION OF SATELLITE CELLS BY MYOSTATINKNOCKOUT | 第82-85页 |
| 4.4.10 MYOSTATIN KNOCKOUT PROMOTES DIFFERENTIATION IN SATELLITECELLS | 第85页 |
| 4.4.11 EXPRESSION PATTERNS OF THE VARIOUS GROWTH FACTOR GENES DURINGPSC PROLIFERATION | 第85-88页 |
| 4.4.12 EXPRESSION PATTERNS OF THE MYOGENIC MARKER GENES DURING PSCDIFFERENTIATION | 第88-90页 |
| 4.4.13 MYOSTATIN AND FOLLISTATIN PROTEIN EXPRESSION DURINGPROUFERATION | 第90-92页 |
| 4.5 DISCUSSION | 第92-94页 |
| 4.6 CONCLUSION | 第94-95页 |
| CHAPTER 5 SUMARY,GENERAL CONCLOSION AND SUGGESTIONS | 第95-99页 |
| 5.1 SUMARY | 第95-96页 |
| 5.2 GENERAL CONCLOSION | 第96-97页 |
| 5.3 FINDING OF THE PRESESENT STUDY | 第97页 |
| 5.4 FUTURE DIRECTIONS FOR FURTHER STUDY | 第97-99页 |
| REFERENCES | 第99-107页 |
| ACKNOWLEDGEMENTS | 第107-109页 |
| AUTHOR'S BIOGRAPHY | 第109-112页 |
| 附件 | 第112-116页 |
