| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 引言 | 第10-11页 |
| 1 文献综述 | 第11-27页 |
| 1.1 肿瘤 | 第11-13页 |
| 1.2 表皮生长因子受体及其靶向的抗肿瘤研究 | 第13-17页 |
| 1.2.1 表皮生长因子受体 | 第13-14页 |
| 1.2.2 EGFR的过表达及其靶向的抗肿瘤研究 | 第14-17页 |
| 1.2.3 现存单克隆抗体在抗肿瘤研究中的局限性 | 第17页 |
| 1.3 纳米抗体技术 | 第17-22页 |
| 1.3.1 纳米抗体结构特点及其理化性质 | 第17-19页 |
| 1.3.2 纳米抗体的应用 | 第19-22页 |
| 1.3.3 纳米抗体的生产 | 第22页 |
| 1.4 包涵体的复性 | 第22-25页 |
| 1.4.1 包涵体的概述 | 第22-23页 |
| 1.4.2 蛋白质折叠复性及主要影响因素 | 第23-25页 |
| 1.4.3 包涵体复性的常用方法 | 第25页 |
| 1.5 本论文的研究目的及意义 | 第25-27页 |
| 2 五种EGFR纳米抗体的原核表达 | 第27-38页 |
| 2.1 引言 | 第27页 |
| 2.2 实验材料 | 第27-30页 |
| 2.2.1 材料及试剂 | 第27-29页 |
| 2.2.2 主要仪器 | 第29-30页 |
| 2.3 实验方法 | 第30-32页 |
| 2.3.1 目的基因的合成 | 第30页 |
| 2.3.2 感受态细胞的制备及目的片段的转化 | 第30页 |
| 2.3.3 重组蛋白的诱导表达及表达条件优化 | 第30-31页 |
| 2.3.4 重组蛋白的可溶性检测 | 第31页 |
| 2.3.5 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第31页 |
| 2.3.6 琼脂糖凝胶电泳 | 第31-32页 |
| 2.4 实验结果与讨论 | 第32-37页 |
| 2.4.1 五种目的蛋白的表达 | 第32-33页 |
| 2.4.2 重组蛋白诱导表达条件的优化 | 第33-36页 |
| 2.4.3 重组蛋白的可溶性检测 | 第36-37页 |
| 2.5 小结 | 第37-38页 |
| 3 五种EGFR纳米抗体的分离纯化及复性研究 | 第38-62页 |
| 3.1 引言 | 第38-39页 |
| 3.2 实验材料 | 第39-41页 |
| 3.2.1 材料和试剂 | 第39-40页 |
| 3.2.2 主要仪器 | 第40-41页 |
| 3.3 实验方法 | 第41-46页 |
| 3.3.1 包涵体的提取、初步纯化及变性 | 第41页 |
| 3.3.2 金属离子螯合层析纯化重组蛋白 | 第41-42页 |
| 3.3.3 重组蛋白的透析复性 | 第42-43页 |
| 3.3.4 重组蛋白的稀释复性及优化 | 第43-45页 |
| 3.3.5 Bradford法测定蛋白含量 | 第45页 |
| 3.3.6 复性后蛋白抗原结合活性的细胞ELISA检测 | 第45-46页 |
| 3.4 实验结果与讨论 | 第46-61页 |
| 3.4.1 Bradford法测定蛋白标准曲线 | 第46-47页 |
| 3.4.2 包涵体的提取及初步纯化 | 第47-48页 |
| 3.4.3 金属离子螯合层析纯化重组蛋白 | 第48-54页 |
| 3.4.4 重组蛋白的透析复性 | 第54页 |
| 3.4.5 重组蛋白的稀释复性及优化 | 第54-61页 |
| 3.4.6 纯化及复性工艺总结 | 第61页 |
| 3.5 小结 | 第61-62页 |
| 4 EGFR纳米抗体与癌细胞的识别与作用 | 第62-73页 |
| 4.1 引言 | 第62页 |
| 4.2 实验材料 | 第62-64页 |
| 4.2.1 材料和试剂 | 第62-64页 |
| 4.2.2 主要仪器 | 第64页 |
| 4.3 实验方法 | 第64-69页 |
| 4.3.1 A431,MCF-7细胞的传代培养 | 第64-65页 |
| 4.3.2 培养细胞的复苏与冰冻保存 | 第65页 |
| 4.3.3 五种EGFR纳米抗体的细胞ELISA检测 | 第65-66页 |
| 4.3.4 间接免疫荧光检测EGFR纳米抗体与肿瘤细胞的识别 | 第66-68页 |
| 4.3.5 MTT法验证纳米抗体特异性及其对肿瘤细胞增殖的影响 | 第68-69页 |
| 4.4 实验结果与讨论 | 第69-72页 |
| 4.4.1 五种EGFR纳米抗体抗原结合活性的比较 | 第69-70页 |
| 4.4.2 EGFR纳米抗体与肿瘤细胞的相互识别 | 第70页 |
| 4.4.3 EGFR纳米抗体抑制EGF介导的肿瘤细胞增殖 | 第70-72页 |
| 4.5 小结 | 第72-73页 |
| 结论 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-81页 |
| 附录A EGFR纳米抗体基因序列 | 第81-83页 |
| 附录B 英文缩写表 | 第83-84页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第84-85页 |
| 致谢 | 第85-86页 |
