| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 缩略语表 | 第7-9页 |
| 目录 | 第9-12页 |
| 第1章 前言 | 第12-24页 |
| ·酒精体内代谢过程 | 第12-13页 |
| ·酿酒酵母乙醇脱氢酶、乙醛脱氢酶的研究进展 | 第13-21页 |
| ·乙醇脱氢酶 | 第13-16页 |
| ·乙醛脱氢酶 | 第16-21页 |
| ·乙醇脱氢酶、乙醛脱氢酶的分离纯化 | 第21-22页 |
| ·ADH的分离纯化 | 第21页 |
| ·ALDH的分离纯化 | 第21-22页 |
| ·乙醇脱氢酶和乙醛脱氢酶的应用 | 第22页 |
| ·乙醇脱氢酶的应用 | 第22页 |
| ·乙醛脱氢酶的应用 | 第22页 |
| ·主要研究内容和意义 | 第22-24页 |
| ·主要研究内容 | 第22-23页 |
| ·研究意义 | 第23-24页 |
| 第2章 乙醇脱氢酶2和乙醛脱氢酶克隆与表达 | 第24-45页 |
| ·材料、仪器与试剂 | 第24-26页 |
| ·材料 | 第24页 |
| ·主要仪器 | 第24-25页 |
| ·培养基和溶液 | 第25-26页 |
| ·生化试剂 | 第26页 |
| ·方法与步骤 | 第26-32页 |
| ·引物设计 | 第26-27页 |
| ·酵母基因组的提取 | 第27页 |
| ·乙醇脱氢酶2和乙醛脱氢酶基因PCR扩增与鉴定 | 第27-28页 |
| ·表达载体pRX2质粒的提取(试剂盒提取) | 第28页 |
| ·质粒pRX2和目的片段的双酶切 | 第28-29页 |
| ·原核表达载体pRX2与目的片段连接 | 第29页 |
| ·大肠杆菌DH5α电转感受态细胞的制备 | 第29-30页 |
| ·连接产物的转化 | 第30页 |
| ·阳性克隆子的筛选与鉴定 | 第30-31页 |
| ·重组质粒转化至表达宿主菌 | 第31页 |
| ·重组蛋白的高密度自诱导表达 | 第31-32页 |
| ·结果与分析 | 第32-42页 |
| ·PCR扩增结果 | 第32-33页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第33-38页 |
| ·原核表达质粒在大肠杆菌中诱导表达及可溶性分析 | 第38-42页 |
| ·讨论与小结 | 第42-45页 |
| ·讨论 | 第42-43页 |
| ·小结 | 第43-45页 |
| 第3章 乙醇脱氢酶2复性与酶学性质分析和乙醛脱氢酶纯化与酶学性质分析 | 第45-66页 |
| ·仪器与试剂 | 第45-46页 |
| ·主要仪器 | 第45页 |
| ·主要试剂 | 第45-46页 |
| ·方法 | 第46-51页 |
| ·ADH2复性 | 第47页 |
| ·FPLC纯化蛋白条件的研究 | 第47-48页 |
| ·日的蛋白的纯化 | 第48页 |
| ·Bradford法测定蛋白浓度 | 第48-49页 |
| ·目的蛋白酶活测定 | 第49-50页 |
| ·目的蛋白酶学性质分析 | 第50-51页 |
| ·结果 | 第51-63页 |
| ·ADH2复性 | 第51页 |
| ·FPLC纯化蛋白优化条件的分析 | 第51-54页 |
| ·目的蛋白纯化 | 第54-55页 |
| ·目的蛋白浓度的测定 | 第55-56页 |
| ·目的蛋白酶活力测定 | 第56-57页 |
| ·目的蛋白酶学性质分析 | 第57-63页 |
| ·讨论与小结 | 第63-66页 |
| ·讨论 | 第63-65页 |
| ·小结 | 第65-66页 |
| 第4章 两种水生动物抗菌肽的原核表达及活性分析 | 第66-81页 |
| ·材料和试剂 | 第67-68页 |
| ·材料 | 第67-68页 |
| ·主要试剂 | 第68页 |
| ·缓冲液体系 | 第68页 |
| ·方法 | 第68-74页 |
| ·引物 | 第68页 |
| ·抗菌肽CEC1和Y18可能结构的预测 | 第68-69页 |
| ·pGEX-Y18和pGEX-CEC1表达载体的构建 | 第69-73页 |
| ·Y18和CEC1融合蛋白的诱导表达 | 第73页 |
| ·Y18和CECI融合蛋白的复性与酶切 | 第73-74页 |
| ·体外抗菌肤活性测定 | 第74页 |
| ·结果 | 第74-79页 |
| ·抗菌肽CEC1和Y18的可能结构及作用模式 | 第74页 |
| ·融合蛋白表达载体的构建和鉴定 | 第74-76页 |
| ·两种融合蛋白的诱导表达 | 第76-77页 |
| ·可溶性融合蛋白的纯化与凝血酶酶切 | 第77页 |
| ·包涵体的复性与凝血酶酶切 | 第77-78页 |
| ·两种抗菌肽抗菌活性的检测 | 第78-79页 |
| ·讨论与小结 | 第79-81页 |
| 第5章 结论与展望 | 第81-82页 |
| ·结论 | 第81页 |
| ·展望 | 第81-82页 |
| 参考文献 | 第82-89页 |
| 致谢 | 第89-90页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第90页 |
| 个人简历 | 第90页 |