| 致谢 | 第6-8页 |
| 中文摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 目录 | 第12-19页 |
| 缩写、术语中英文对照表 | 第19-21页 |
| 第一章 绪论 | 第21-53页 |
| 1 引言 | 第21页 |
| 2 肿瘤多药耐药的产生机理 | 第21-33页 |
| 2.1 ATP结合盒式转运蛋白作用(ATP-binding cassette transporter,ABCtransporter) | 第22-28页 |
| 2.1.1 P-糖蛋白(ABCB1,MDR1) | 第22-23页 |
| 2.1.2 多药耐药相关蛋白(ABCC,MRP) | 第23-24页 |
| 2.1.3 乳腺癌耐药蛋白(ABCG2,BCRP) | 第24-28页 |
| 2.2 肺耐药蛋白(LRP)作用 | 第28-29页 |
| 2.3 microRNA调控 | 第29页 |
| 2.4 DNA损伤修复增强 | 第29页 |
| 2.5 凋亡通路受阻 | 第29-30页 |
| 2.6 药物代谢解毒作用增强 | 第30-31页 |
| 2.7 靶酶TOPO Ⅱ活性改变 | 第31-32页 |
| 2.8 其他 | 第32-33页 |
| 2.8.1 肿瘤干细胞存在 | 第32-33页 |
| 2.8.2 缺氧诱导 | 第33页 |
| 2.8.3 癌基因活化 | 第33页 |
| 3 逆转肿瘤多药耐药的方法 | 第33-39页 |
| 3.1 纳米药物载体 | 第33-35页 |
| 3.2 RNA干扰(RNAi)技术 | 第35-39页 |
| 3.3 P-gp抑制剂 | 第39页 |
| 4 挑战与展望 | 第39-40页 |
| 5 课题的提出 | 第40页 |
| 6 参考文献 | 第40-53页 |
| 第二章 类PEI型低毒聚天冬酰胺胺基衍生物作为基因载体的体内外研究 | 第53-77页 |
| 1 引言 | 第53-54页 |
| 2 材料和仪器 | 第54-56页 |
| 2.1 材料和试剂 | 第54-55页 |
| 2.2 细胞和动物 | 第55-56页 |
| 2.3 实验仪器 | 第56页 |
| 3 实验方法与步骤 | 第56-61页 |
| 3.1 聚天冬酰胺衍生物PEE的合成 | 第56-57页 |
| 3.1.1 聚琥珀酰亚胺(poly-D,L-succinimide,PSI)的合成 | 第56-57页 |
| 3.1.2 聚天冬酰胺胺基衍生物PEE的合成 | 第57页 |
| 3.2 聚天冬酰胺胺基衍生物PEE的物理化学表征 | 第57-58页 |
| 3.2.1 PEE的氢核磁共振波谱(~1H-NMR) | 第57页 |
| 3.2.2 PEE/DNA的制备和形态学表征 | 第57-58页 |
| 3.3 聚天冬酰胺衍生物PEE的体外细胞学研究 | 第58-60页 |
| 3.3.1 细胞摄取实验 | 第58页 |
| 3.3.2 PEE的MTT法细胞毒性实验 | 第58-59页 |
| 3.3.3 PEE的绿色荧光蛋白转染实验 | 第59-60页 |
| 3.4 聚天冬酰胺胺基衍生物PEE的体内应用研究 | 第60-61页 |
| 3.4.1 PEE的体内毒性评价 | 第60页 |
| 3.4.2 荷瘤动物模型的建立 | 第60页 |
| 3.4.3 活体荧光成像实验 | 第60-61页 |
| 3.4.4 肿瘤冰冻切片 | 第61页 |
| 3.5 数据的统计学处理 | 第61页 |
| 4 实验结果 | 第61-72页 |
| 4.1 聚天冬酰胺胺基衍生物PEE的合成 | 第61-63页 |
| 4.2 聚天冬酰胺胺基衍生物PEE的化学结构 | 第63-64页 |
| 4.3 PEE/DNA的形态学表征 | 第64-65页 |
| 4.4 聚天冬酰胺衍生物PEE的体外细胞摄取 | 第65-66页 |
| 4.5 聚天冬酰胺衍生物PEE细胞毒性 | 第66-67页 |
| 4.6 PEE的绿色荧光蛋白的转染 | 第67-69页 |
| 4.7 小鼠血象指标的测定 | 第69-70页 |
| 4.8 H/E染色病理检查 | 第70-71页 |
| 4.9 体内绿色荧光蛋白转染实验 | 第71-72页 |
| 5 讨论 | 第72-74页 |
| 6 本章小结 | 第74页 |
| 7 参考文献 | 第74-77页 |
| 第三章 PEI衍生物胶束携载基因和药物逆转肿瘤多药耐药的研究 | 第77-130页 |
| 1 引言 | 第77-79页 |
| 2 材料和仪器 | 第79-82页 |
| 2.1 材料和试剂 | 第79-81页 |
| 2.2 细胞和动物 | 第81页 |
| 2.3 实验仪器 | 第81-82页 |
| 3 实验方法与步骤 | 第82-94页 |
| 3.1 聚乙烯亚胺-环糊精-胆固醇(PCC)的合成 | 第82-83页 |
| 3.1.1 聚乙烯亚胺-环糊精(PEI-CyD,PC)的合成 | 第82页 |
| 3.1.2 聚乙稀亚胺-环糊精-胆固醇（PCC)的合成 | 第82-83页 |
| 3.2 聚乙烯亚胺-环糊精-胆固醇(PCC)的表征 | 第83-86页 |
| 3.2.1 氢核磁共振波谱法(~1H-NMR) | 第83页 |
| 3.2.2 傅里叶红外光谱法(FT-IR) | 第83页 |
| 3.2.3 X射线粉末衍射法(XRD) | 第83页 |
| 3.2.4 差示扫描量热法(DSC) | 第83-84页 |
| 3.2.5 聚乙烯亚胺-环糊精-胆固醇(PCC)临界胶束浓度(CMC)的测定 | 第84页 |
| 3.2.6 聚乙烯亚胺-环糊精-胆固醇(PCC)的琼脂糖凝胶电泳实验 | 第84-85页 |
| 3.2.7 聚乙烯亚胺-环糊精-胆固醇(PCC)胶束粒径电位的测定 | 第85页 |
| 3.2.8 聚乙烯亚胺-环糊精-胆固醇(PCC)的细胞毒性实验 | 第85-86页 |
| 3.3 聚乙烯亚胺-环糊精-胆固醇(PCC)胶束的制备和表征 | 第86-88页 |
| 3.3.1 聚乙烯亚胺-环糊精-胆固醇(PCC)胶束的制备 | 第86页 |
| 3.3.2 聚乙烯亚胺-环糊精-胆固醇(PCC)胶束载药量的测定 | 第86页 |
| 3.3.3 核欧佛豪瑟效应频谱(NOESY spectrum) | 第86-87页 |
| 3.3.4 聚乙烯亚胺-环糊精-胆固醇(PCC)胶束形态学表征 | 第87页 |
| 3.3.5 聚乙烯亚胺-环糊精-胆固醇(PCC)胶束体外释放 | 第87-88页 |
| 3.4 聚乙烯亚胺-环糊精-胆固醇载药胶束(PCC/DOX)的体外细胞研究 | 第88-92页 |
| 3.4.1 细胞摄取实验 | 第88页 |
| 3.4.2 不同的靶向MDR1 siRNA对MDRl的沉默实验 | 第88-89页 |
| 3.4.3 GFP-22绿色荧光沉默实验 | 第89页 |
| 3.4.4 阿霉素的细胞外排实验 | 第89页 |
| 3.4.5 阿霉素的细胞内富集实验 | 第89-90页 |
| 3.4.6 免疫印迹法(Western blotting) | 第90页 |
| 3.4.7 逆转录聚合酶链式扩增法(RT-PCR) | 第90-92页 |
| 3.5 聚乙烯亚胺-环糊精-胆固醇载药胶束(PCC/DOX)的体内功能研究 | 第92-94页 |
| 3.5.1 荷瘤动物模型的建立 | 第92-93页 |
| 3.5.2 肿瘤生长抑制实验 | 第93页 |
| 3.5.3 荷瘤裸鼠生存期观察 | 第93页 |
| 3.5.4 ~(18)F-FDG microPET成像 | 第93页 |
| 3.5.5 Western blotting法检测蛋白的表达 | 第93-94页 |
| 3.5.6 RT-PCR法检测mRNA的表达 | 第94页 |
| 3.6 数据的统计学处理 | 第94页 |
| 4 实验结果 | 第94-123页 |
| 4.1 聚阳离子PCC的合成和表征 | 第94-104页 |
| 4.1.1 聚阳离子PCC的合成 | 第94-96页 |
| 4.1.2 核磁共振氢谱(~1H NMR) | 第96-98页 |
| 4.1.3 傅里叶红外光谱测定(FT-IR) | 第98-99页 |
| 4.1.4 X射线粉末衍射(XRD) | 第99-100页 |
| 4.1.5 差示扫描量热法(DSC) | 第100页 |
| 4.1.6 临界胶束浓度(CMC) | 第100-101页 |
| 4.1.7 凝胶电泳阻滞实验 | 第101-102页 |
| 4.1.8 PCC胶束的粒径和电位 | 第102页 |
| 4.1.9 MTT法测定细胞毒性 | 第102-104页 |
| 4.2 PCC载药胶束的制备和表征 | 第104-108页 |
| 4.2.1 PCC载DOX胶束的制备和载药量测定 | 第104页 |
| 4.2.2 核欧佛豪瑟效应频谱(NOESY spectrum) | 第104-105页 |
| 4.2.3 PCC载药胶束的形态学表征 | 第105-107页 |
| 4.2.4 PCC/DOX载药胶束的体外释放 | 第107-108页 |
| 4.3 聚乙烯亚胺-环糊精-胆固醇载药胶束(PCC/DOX)的体外细胞研究 | 第108-118页 |
| 4.3.1 细胞摄取 | 第108页 |
| 4.3.2 PCC携带siRNA的最佳质量比的筛选 | 第108-109页 |
| 4.3.3 靶向MDR1的siRNA的筛选 | 第109-112页 |
| 4.3.4 阿霉素的细胞内富集 | 第112-114页 |
| 4.3.5 Western blotting法检测蛋白的表达 | 第114-117页 |
| 4.3.6 逆转录聚合酶链式扩增法(RT-PCR)检测mRNA的表达 | 第117-118页 |
| 4.4 聚乙烯亚胺-环糊精-胆固醇载药胶束(PCC/DOX)的体内功能研究 | 第118-123页 |
| 4.4.1 在体肿瘤生长抑制实验 | 第118-119页 |
| 4.4.2 ~(18)F-FDG microPET成像结果 | 第119-121页 |
| 4.4.3 荷瘤裸鼠生存期观察 | 第121-122页 |
| 4.4.4 Western blotting法检测肿瘤内蛋白表达 | 第122-123页 |
| 4.4.5 RT-PCR法检测肿瘤内mRNA表达 | 第123页 |
| 5 讨论 | 第123-126页 |
| 6 本章小结 | 第126页 |
| 7 参考文献 | 第126-130页 |
| 第四章 PEI衍生物胶束携载基因药物体系对耐药细胞基因表达谱的初探 | 第130-159页 |
| 1 引言 | 第130-131页 |
| 2 材料与仪器 | 第131-132页 |
| 2.1 材料和试剂 | 第131-132页 |
| 2.2 实验细胞 | 第132页 |
| 3 实验方法 | 第132-136页 |
| 3.1 PCC载药胶束制备和载药量测定 | 第132页 |
| 3.2 MTT法细胞毒性测定 | 第132页 |
| 3.3 PCC/siRNA/药物系统对A2780/T转录谱影响研究 | 第132-133页 |
| 3.4 RNA-seq | 第133-136页 |
| 4 实验结果 | 第136-154页 |
| 4.1 PCC载药量的测定 | 第136页 |
| 4.2 MTT法测定细胞毒性 | 第136-137页 |
| 4.3 RNA-seq结果分析 | 第137-154页 |
| 4.3.1 A2780/T暴露于PTX 30天后基因的差异表达 | 第137-141页 |
| 4.3.2 A2780/T暴露于PCC/PTX 30天后基因的差异表达 | 第141-143页 |
| 4.3.3 A2780/T暴露于PCC/PTX/siMDR1 30天后基因的差异表达 | 第143-147页 |
| 4.3.4 A2780/T暴露于PTX与PCC/PTX 30天后基因的差异表达 | 第147-151页 |
| 4.3.5 A2780/T暴露于PTX与PCC/PTX/siMDR1 30天后基因的差异表达 | 第151-154页 |
| 4.3.6 聚类富集分析和模式富集分析 | 第154页 |
| 5 讨论 | 第154-155页 |
| 6 本章小结 | 第155-158页 |
| 7 参考文献 | 第158-159页 |
| 全文总结、创新点及未来的研究方向 | 第159-162页 |
| 全文结论 | 第159-160页 |
| 主要创新点 | 第160页 |
| 未来研究方向 | 第160-161页 |
| 展望 | 第161-162页 |
| 攻读博士学位期间主要研究成果 | 第162页 |
