致谢 | 第4-5页 |
英文缩略词表 | 第5-9页 |
摘要 | 第9-10页 |
1 文献综述 | 第10-18页 |
1.1 仔猪腹泻 | 第10页 |
1.2 肠黏膜保护因子 | 第10-14页 |
1.2.1 抗分泌因子(AF) | 第10-11页 |
1.2.1.1 抗分泌因子(AF)结构特点和性质 | 第10-11页 |
1.2.1.2 抗分泌因子(AF)生理功能 | 第11页 |
1.2.2 血红素加氧酶(HO) | 第11-13页 |
1.2.2.1 血红素加氧酶(HO)结构特点和性质 | 第11-12页 |
1.2.2.2 血红素加氧酶-1(HO-1)生理功能 | 第12-13页 |
1.2.3 三叶肽 | 第13-14页 |
1.2.3.1 三叶肽结构特点和性质 | 第13-14页 |
1.2.3.2 肠三叶因子(TFF3)生理功能 | 第14页 |
1.3 短小芽孢杆菌及其表达系统 | 第14-17页 |
1.3.1 短小芽孢杆菌 | 第15-16页 |
1.3.1.1 短小芽孢杆菌作为基因工程菌优势 | 第15页 |
1.3.1.2 短小芽孢杆菌作为益生菌的优势 | 第15-16页 |
1.3.2 表达载体pNCMO2 | 第16-17页 |
1.4 展望 | 第17-18页 |
2 引言 | 第18-19页 |
3 材料与方法 | 第19-29页 |
3.1 试验材料 | 第19页 |
3.2 菌株和质粒 | 第19页 |
3.3 主要试剂 | 第19页 |
3.4 主要仪器 | 第19页 |
3.5 常规试剂配制 | 第19-22页 |
3.5.1 核酸电泳试剂 | 第19页 |
3.5.2 SDS-PAGE试剂 | 第19-20页 |
3.5.3 Western Blot试剂 | 第20-21页 |
3.5.4 培养基配制 | 第21页 |
3.5.5 抗生素配制 | 第21-22页 |
3.5.6 其他试剂配制 | 第22页 |
3.6 猪肠黏膜保护因子的克隆 | 第22-24页 |
3.6.1 猪AF、HO-1、TFF3基因引物设计 | 第22-23页 |
3.6.2 RNA提取 | 第23页 |
3.6.3 cDNA合成 | 第23页 |
3.6.4 猪AF、HO-1、TFF3基因PCR扩增 | 第23-24页 |
3.6.5 PCR产物胶回收 | 第24页 |
3.7 重组表达载体构建 | 第24-26页 |
3.7.1 猪肠黏膜保护因子连接pMD19-T载体 | 第24页 |
3.7.2 连接产物转化感受态细胞 | 第24页 |
3.7.3 阳性克隆菌的筛选与鉴定 | 第24-25页 |
3.7.4 载体双酶切 | 第25页 |
3.7.5 酶切产物胶回收 | 第25页 |
3.7.6 T4 DNA连接酶连接反应 | 第25-26页 |
3.7.7 阳性克隆菌的筛选与鉴定 | 第26页 |
3.8 猪肠黏膜保护因子在短小芽孢杆菌中的诱导表达 | 第26-29页 |
3.8.1 短小芽孢杆菌的电转化 | 第26-27页 |
3.8.1.1 短小芽孢杆菌的培养 | 第26页 |
3.8.1.2 短小芽孢杆菌感受态的制备 | 第26页 |
3.8.1.3 电穿孔转化 | 第26-27页 |
3.8.1.4 阳性克隆菌的筛选与鉴定 | 第27页 |
3.8.2 猪AF、HO-1、TFF3基因的诱导表达 | 第27页 |
3.8.3 样品处理 | 第27页 |
3.8.4 SDS-PAGE | 第27页 |
3.8.5 Western Blot | 第27-29页 |
4 结果与分析 | 第29-39页 |
4.1 猪肠黏膜保护因子的克隆及鉴定 | 第29-30页 |
4.2 重组表达载体的构建 | 第30-33页 |
4.2.1 pMD19-T-AF、pMD19-T-HO-1、pMD19-T-TFF3载体构建 | 第30-31页 |
4.2.2 pNCMO2-AF、pNCMO2-HO-1、pNCMO2-TFF3载体构建 | 第31-33页 |
4.3 猪肠黏膜保护因子在短小芽孢杆菌中的诱导表达 | 第33-39页 |
4.3.1 短小芽孢杆菌的培养 | 第33页 |
4.3.2 短小芽孢杆菌的电转化 | 第33-36页 |
4.3.3 SDS-PAGE检测猪肠黏膜保护因子的表达 | 第36-37页 |
4.3.4 Western blot检测猪肠黏膜保护因子的表达 | 第37-39页 |
5 结论与讨论 | 第39-41页 |
5.1 讨论 | 第39-40页 |
5.1.1 猪肠黏膜保护因子基因克隆 | 第39页 |
5.1.2 猪肠黏膜保护因子短小芽孢杆菌表达系统 | 第39-40页 |
5.2 结论 | 第40-41页 |
参考文献 | 第41-52页 |
ABSTRACT | 第52页 |