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猪肠黏膜保护因子的短小芽孢杆菌表达系统建立

致谢第4-5页
英文缩略词表第5-9页
摘要第9-10页
1 文献综述第10-18页
    1.1 仔猪腹泻第10页
    1.2 肠黏膜保护因子第10-14页
        1.2.1 抗分泌因子(AF)第10-11页
            1.2.1.1 抗分泌因子(AF)结构特点和性质第10-11页
            1.2.1.2 抗分泌因子(AF)生理功能第11页
        1.2.2 血红素加氧酶(HO)第11-13页
            1.2.2.1 血红素加氧酶(HO)结构特点和性质第11-12页
            1.2.2.2 血红素加氧酶-1(HO-1)生理功能第12-13页
        1.2.3 三叶肽第13-14页
            1.2.3.1 三叶肽结构特点和性质第13-14页
            1.2.3.2 肠三叶因子(TFF3)生理功能第14页
    1.3 短小芽孢杆菌及其表达系统第14-17页
        1.3.1 短小芽孢杆菌第15-16页
            1.3.1.1 短小芽孢杆菌作为基因工程菌优势第15页
            1.3.1.2 短小芽孢杆菌作为益生菌的优势第15-16页
        1.3.2 表达载体pNCMO2第16-17页
    1.4 展望第17-18页
2 引言第18-19页
3 材料与方法第19-29页
    3.1 试验材料第19页
    3.2 菌株和质粒第19页
    3.3 主要试剂第19页
    3.4 主要仪器第19页
    3.5 常规试剂配制第19-22页
        3.5.1 核酸电泳试剂第19页
        3.5.2 SDS-PAGE试剂第19-20页
        3.5.3 Western Blot试剂第20-21页
        3.5.4 培养基配制第21页
        3.5.5 抗生素配制第21-22页
        3.5.6 其他试剂配制第22页
    3.6 猪肠黏膜保护因子的克隆第22-24页
        3.6.1 猪AF、HO-1、TFF3基因引物设计第22-23页
        3.6.2 RNA提取第23页
        3.6.3 cDNA合成第23页
        3.6.4 猪AF、HO-1、TFF3基因PCR扩增第23-24页
        3.6.5 PCR产物胶回收第24页
    3.7 重组表达载体构建第24-26页
        3.7.1 猪肠黏膜保护因子连接pMD19-T载体第24页
        3.7.2 连接产物转化感受态细胞第24页
        3.7.3 阳性克隆菌的筛选与鉴定第24-25页
        3.7.4 载体双酶切第25页
        3.7.5 酶切产物胶回收第25页
        3.7.6 T4 DNA连接酶连接反应第25-26页
        3.7.7 阳性克隆菌的筛选与鉴定第26页
    3.8 猪肠黏膜保护因子在短小芽孢杆菌中的诱导表达第26-29页
        3.8.1 短小芽孢杆菌的电转化第26-27页
            3.8.1.1 短小芽孢杆菌的培养第26页
            3.8.1.2 短小芽孢杆菌感受态的制备第26页
            3.8.1.3 电穿孔转化第26-27页
            3.8.1.4 阳性克隆菌的筛选与鉴定第27页
        3.8.2 猪AF、HO-1、TFF3基因的诱导表达第27页
        3.8.3 样品处理第27页
        3.8.4 SDS-PAGE第27页
        3.8.5 Western Blot第27-29页
4 结果与分析第29-39页
    4.1 猪肠黏膜保护因子的克隆及鉴定第29-30页
    4.2 重组表达载体的构建第30-33页
        4.2.1 pMD19-T-AF、pMD19-T-HO-1、pMD19-T-TFF3载体构建第30-31页
        4.2.2 pNCMO2-AF、pNCMO2-HO-1、pNCMO2-TFF3载体构建第31-33页
    4.3 猪肠黏膜保护因子在短小芽孢杆菌中的诱导表达第33-39页
        4.3.1 短小芽孢杆菌的培养第33页
        4.3.2 短小芽孢杆菌的电转化第33-36页
        4.3.3 SDS-PAGE检测猪肠黏膜保护因子的表达第36-37页
        4.3.4 Western blot检测猪肠黏膜保护因子的表达第37-39页
5 结论与讨论第39-41页
    5.1 讨论第39-40页
        5.1.1 猪肠黏膜保护因子基因克隆第39页
        5.1.2 猪肠黏膜保护因子短小芽孢杆菌表达系统第39-40页
    5.2 结论第40-41页
参考文献第41-52页
ABSTRACT第52页

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