| 摘要 | 第9-11页 |
| ABSTRACT | 第11-12页 |
| 第1章 绪论 | 第13-25页 |
| 1.1 信号转导与转录激活因子 5 | 第13-15页 |
| 1.1.1 Stat5的结构 | 第13-14页 |
| 1.1.2 Stat5的生物学效应 | 第14-15页 |
| 1.2 Stat5a剪接变体Delta 5 Stat5a | 第15-16页 |
| 1.2.1 Delta 5 Stat5a的发现及结构特征 | 第15页 |
| 1.2.2 ?5 Stat5a的生物学功能 | 第15-16页 |
| 1.3 Stat5a的信号通路研究 | 第16-20页 |
| 1.3.1 正常乳腺发育中的Stat5信号通路 | 第18-19页 |
| 1.3.2 Stat5与乳腺癌 | 第19-20页 |
| 1.4 微小RNA | 第20-23页 |
| 1.4.1 微小RNA的结构及特征 | 第20-21页 |
| 1.4.2 mi RNA的细胞内加工及作用方式 | 第21页 |
| 1.4.3 mi RNA与乳腺癌 | 第21-23页 |
| 1.5 研究目的和意义 | 第23页 |
| 1.6 研究内容及技术路线 | 第23-25页 |
| 第2章 FL Stat5a和 Δ5 Stat5a稳转乳腺癌MCF-7 细胞株构建与鉴定 | 第25-36页 |
| 2.1 材料 | 第25-28页 |
| 2.1.1 细胞系 | 第25页 |
| 2.1.2 菌株与质粒 | 第25-26页 |
| 2.1.3 仪器设备 | 第26-27页 |
| 2.1.4 实验试剂 | 第27-28页 |
| 2.1.5 引物 | 第28页 |
| 2.2 方法 | 第28-31页 |
| 2.2.1 模版质粒DNA抽提分离 | 第28页 |
| 2.2.2 人乳腺上皮细胞FL Stat5a和 Δ5 Stat5a基因PCR扩增 | 第28页 |
| 2.2.3 载体和目的基因双酶切 | 第28-29页 |
| 2.2.4 载体与FL Stat5a和 Δ5 Stat5a连接、转化 | 第29-30页 |
| 2.2.5 p LVX-FL和p LVX-Δ5 的酶切和测序鉴定 | 第30页 |
| 2.2.6 慢病毒包装 | 第30页 |
| 2.2.7 病毒滴度测定 | 第30-31页 |
| 2.2.8 稳转细胞筛选 | 第31页 |
| 2.3 结果与分析 | 第31-34页 |
| 2.3.1 p LVX-FL和p LVX-Δ5 的酶切鉴定 | 第31页 |
| 2.3.2 p LVX-FL和p LVX-Δ5 测序分析 | 第31-32页 |
| 2.3.3 r LV-FL和r LV-Δ5 慢病毒包装结果 | 第32-33页 |
| 2.3.4 MCF7-FL和MCF7-Δ5 稳转细胞株筛选 | 第33页 |
| 2.3.5 MCF7-FL和MCF7-Δ5 稳转细胞鉴定 | 第33-34页 |
| 2.4 讨论 | 第34-36页 |
| 2.4.1 外源基因转染细胞 | 第34-35页 |
| 2.4.2 稳转细胞构建 | 第35-36页 |
| 第3章 ?5 Stat5a对乳腺上皮细胞mi RNA表达的影响 | 第36-57页 |
| 3.1 材料 | 第36-38页 |
| 3.1.1 细胞株 | 第36页 |
| 3.1.2 仪器设备 | 第36-37页 |
| 3.1.3 实验试剂 | 第37页 |
| 3.1.4 软件及数据库 | 第37-38页 |
| 3.2 方法 | 第38-40页 |
| 3.2.1 稳转细胞复苏与传代 | 第38页 |
| 3.2.2 稳转细胞总RNA分离纯化 | 第38页 |
| 3.2.3 c DNA文库构建 | 第38页 |
| 3.2.4 测序数据除杂 | 第38-39页 |
| 3.2.5 公共及特有序列与全基因组比对分析 | 第39页 |
| 3.2.6 nc RNA分类与注释 | 第39页 |
| 3.2.7 已知mi RNA的表达量分析 | 第39页 |
| 3.2.8 新mi RNA的预测 | 第39-40页 |
| 3.2.9 mi RNA差异表达分析 | 第40页 |
| 3.3 结果与分析 | 第40-53页 |
| 3.3.1 RNA质量检测 | 第40-41页 |
| 3.3.2 测序原始数据除杂筛选 | 第41-42页 |
| 3.3.3 共有序列及全基因组比对分析 | 第42页 |
| 3.3.4 ncRNA分类注释 | 第42页 |
| 3.3.5 miRNA表达量校正统计 | 第42-44页 |
| 3.3.6 miRNA表达分析 | 第44-46页 |
| 3.3.7 miRNA差异表达分析 | 第46-52页 |
| 3.3.8 新mi RNA预测分析 | 第52-53页 |
| 3.4 讨论 | 第53-57页 |
| 3.4.1 关于实验设计与数据分析 | 第53页 |
| 3.4.2 高通量测序 | 第53-54页 |
| 3.4.3 差异表达 | 第54-57页 |
| 第4章 结论与展望 | 第57-59页 |
| 4.1 结论 | 第57-58页 |
| 4.2 展望 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 作者在学期间取得的学术成果 | 第66-67页 |
| 专有名词中英文对照表 | 第67-69页 |
| 附录A 重组慢病毒表达载体测序结果 | 第69-72页 |
| 附录B s RNA在全基因组的分布 | 第72-73页 |
| 附录C s RNA中的重复序列统计 | 第73-75页 |
| 附录D 各样品中分别表达的mi RNA统计 | 第75-113页 |
| D-1 MCF7-Con细胞已知mi RNA表达统计 | 第75-88页 |
| D-2 MCF7-FL细胞已知mi RNA表达统计 | 第88-100页 |
| D-3 MCF7-Δ5 细胞已知mi RNA表达统计 | 第100-113页 |
| 附录E 新mi RNA预测统计 | 第113-120页 |
| E-1 MCF7-Con细胞新mi RNA预测统计 | 第113-115页 |
| E-2 MCF7-FL细胞新mi RNA预测统计 | 第115-117页 |
| E-3 MCF7-Δ5 细胞新mi RNA预测统计 | 第117-120页 |
