| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 1 前言 | 第9-23页 |
| 1.1 尿苷简介 | 第9-10页 |
| 1.1.1 结构及理化性质 | 第9页 |
| 1.1.2 用途 | 第9-10页 |
| 1.2 尿苷的生产方法 | 第10页 |
| 1.2.1 RNA水解法 | 第10页 |
| 1.2.2 化学合成法 | 第10页 |
| 1.2.3 微生物发酵法 | 第10页 |
| 1.3 嘧啶核苷的合成途径及调节机制 | 第10-20页 |
| 1.3.1 尿苷产生菌 | 第10-11页 |
| 1.3.2 枯草芽孢杆菌嘧啶核苷的补救合成途径 | 第11页 |
| 1.3.3 枯草芽孢杆菌嘧啶核苷的从头合成途径 | 第11-12页 |
| 1.3.4 枯草芽孢杆菌嘧啶核苷的代谢调控机制 | 第12-13页 |
| 1.3.5 前体物氨甲酰磷酸的合成及调节机制 | 第13-15页 |
| 1.3.6 前体物5-磷酸核糖-1-焦磷酸(PRPP)的合成及调节机制 | 第15-17页 |
| 1.3.7 副产物乙偶姻的合成及调节机制 | 第17-20页 |
| 1.4 尿苷生产菌育种策略及育种实例 | 第20-22页 |
| 1.4.1 传统诱变育种策略及原理 | 第20页 |
| 1.4.2 基因工程育种策略 | 第20-21页 |
| 1.4.3 国外育种实例 | 第21页 |
| 1.4.4 国内育种实例 | 第21-22页 |
| 1.5 立题背景及研究内容 | 第22-23页 |
| 1.5.1 立题背景 | 第22页 |
| 1.5.2 本论文的研究内容 | 第22-23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-35页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-28页 |
| 2.1.1 菌株 | 第23-24页 |
| 2.1.2 引物 | 第24-25页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第25-26页 |
| 2.1.4 主要试剂 | 第26-27页 |
| 2.1.5 主要溶液 | 第27-28页 |
| 2.1.6 主要培养基 | 第28页 |
| 2.2 实验方法 | 第28-35页 |
| 2.2.1 枯草芽孢杆菌小量DNA的提取 | 第28-29页 |
| 2.2.2 目的片段的扩增 | 第29页 |
| 2.2.3 重叠PCR | 第29-30页 |
| 2.2.4 DNA的回收及纯化 | 第30-31页 |
| 2.2.5 琼脂糖凝胶电泳 | 第31页 |
| 2.2.6 枯草芽孢杆菌化转感受态制作方法 | 第31-32页 |
| 2.2.7 枯草芽孢杆菌基因的无痕修饰方法 | 第32-33页 |
| 2.2.8 菌种保藏 | 第33页 |
| 2.2.9 发酵产尿苷的培养方法及分析检测方法 | 第33-35页 |
| 3 结果与讨论 | 第35-53页 |
| 3.1 出发菌株 B.subtilisF126发酵结果 | 第35页 |
| 3.2 B.subtilisF126prs~(nlv)基因的表达及发酵结果 | 第35-38页 |
| 3.2.1 B.subtilisF126-1菌株的构建 | 第35-37页 |
| 3.2.2 prs~(nlv)基因的表达对尿苷发酵的影响 | 第37-38页 |
| 3.3 减少乙偶姻积累的相关改造 | 第38-46页 |
| 3.3.1 B.subtilisF126-1△alsS菌株的构建及发酵结果 | 第39-40页 |
| 3.3.2 B.subtilisF126-1△alsD菌株的构建及发酵结果 | 第40-43页 |
| 3.3.3 B.subtilisF126-1(△nprE::pycA)菌株的构建及发酵结果 | 第43-46页 |
| 3.4 B.subtilisF126-1△udk菌株构建及发酵结果 | 第46-49页 |
| 3.4.1 F126-1△udk菌株的构建 | 第46-48页 |
| 3.4.2 F126-1UR4菌株发酵结果 | 第48-49页 |
| 3.5 B.subtilisF126-1△argF菌株构建及发酵结果 | 第49-53页 |
| 3.5.1 敲除片段的构建 | 第49-50页 |
| 3.5.2 重组菌的筛选及验证 | 第50-51页 |
| 3.5.3 F126-1UR5菌株发酵结果 | 第51-53页 |
| 4 结论 | 第53-54页 |
| 5 展望 | 第54-55页 |
| 6 参考文献 | 第55-62页 |
| 7 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第62-63页 |
| 8 致谢 | 第63页 |
