| 摘要 | 第4-7页 |
| ABSTRACT | 第7-10页 |
| 缩略词表 | 第13-14页 |
| 第一章 综述 间充质干细胞的分离、分化及在疾病治疗中的应用 | 第14-23页 |
| 1 间充质干细胞的生物特性 | 第14-15页 |
| 2 间充质干细胞的分离及初步培养 | 第15-16页 |
| 3 间充质干细胞的分化潜能 | 第16-19页 |
| 3.1 不同来源的间充质干细胞的分化潜能 | 第16页 |
| 3.2 间充质干细胞的多胚层分化潜能 | 第16-19页 |
| 3.2.1 向外胚层细胞的分化 | 第16-17页 |
| 3.2.2 向中胚层细胞的分化 | 第17-18页 |
| 3.2.3 向内胚层细胞的分化 | 第18-19页 |
| 4 脂肪间充质干细胞在临床医学中的应用 | 第19-22页 |
| 5 展望 | 第22-23页 |
| 第二章 MiR-375、Pdx-1和MafA协同表达对人脂肪间充质干细胞向胰岛素分泌细胞分化的影响 | 第23-57页 |
| 1 引言 | 第23-25页 |
| 1.1 人脂肪间充质干细胞的分离及鉴定 | 第23-24页 |
| 1.2 过表达MiR-375、Pdx-1和MafA对分化的影响探究 | 第24-25页 |
| 2 材料及方法 | 第25-37页 |
| 2.1 试剂及材料 | 第25-26页 |
| 2.2 仪器与设备 | 第26-27页 |
| 2.3 实验方法 | 第27-37页 |
| 2.3.1 人脂肪间充质干细胞的培养、传代、冻存和复苏 | 第27-28页 |
| 2.3.1.1 人脂肪间充质干细胞的维持培养 | 第27页 |
| 2.3.1.2 人脂肪间充质干细胞的传代 | 第27页 |
| 2.3.1.3 人脂肪间充质干细胞的冻存和复苏 | 第27-28页 |
| 2.3.2 人脂肪间充质干细胞的分离及鉴定 | 第28-31页 |
| 2.3.2.1 人脂肪间充质干细胞的分离 | 第28页 |
| 2.3.2.2 人脂肪间充质干细胞的鉴定 | 第28-31页 |
| 2.3.2.2.1 细胞形态的鉴定 | 第28页 |
| 2.3.2.2.2 流式细胞术对细胞表面特异性标志物的鉴定 | 第28-29页 |
| 2.3.2.2.3 成骨、软骨和脂肪细胞的诱导分化及染色鉴定 | 第29-31页 |
| 2.3.2.2.3.1 成骨诱导分化及染色鉴定 | 第29页 |
| 2.3.2.2.3.2 成软骨诱导分化及染色鉴定 | 第29-30页 |
| 2.3.2.2.3.3 成脂诱导分化及染色鉴定 | 第30-31页 |
| 2.3.3 过表达Mi R-375,Pdx-1和MafA对分化的影响探究 | 第31-37页 |
| 2.3.3.1 稳定过表达细胞的建立 | 第31-32页 |
| 2.3.3.2 稳定过表达细胞的定向诱导分化 | 第32-33页 |
| 2.3.3.3 分化方案改良的探究 | 第33页 |
| 2.3.3.4 实时定量荧光PCR(RT-PCR)检测胰腺相关基因的表达 | 第33-35页 |
| 2.3.3.4.1 细胞中RNA的提取 | 第33页 |
| 2.3.3.4.2 反转录PCR | 第33-34页 |
| 2.3.3.4.3 实时定量RT-PCR | 第34-35页 |
| 2.3.3.5 细胞的免疫荧光染色 | 第35页 |
| 2.3.3.6 ELISA法检测胰岛素的分泌 | 第35-37页 |
| 3 结果 | 第37-54页 |
| 3.1 人脂肪间充质干细胞的分离及鉴定 | 第37-43页 |
| 3.1.1 人脂肪间充质干细胞的分离和培养 | 第37-38页 |
| 3.1.2 流式分析细胞表面标志物结果 | 第38-40页 |
| 3.1.3 成骨、软骨和脂肪细胞的诱导分化及染色鉴定 | 第40-43页 |
| 3.1.3.1 成骨诱导分化结果 | 第40页 |
| 3.1.3.2 成软骨诱导分化结果 | 第40-41页 |
| 3.1.3.3 成脂诱导分化结果 | 第41-43页 |
| 3.1.3.3.1 油红O染色法鉴定 | 第41-42页 |
| 3.1.3.3.2 BODIPY探针染色法鉴定 | 第42-43页 |
| 3.2 过表达MiR-375,Pdx-1和MafA对胰岛素分泌细胞分化的影响 | 第43-54页 |
| 3.2.1 稳定过表达细胞的建立 | 第43-44页 |
| 3.2.2 改良分化方案的探究结果 | 第44-46页 |
| 3.2.3 稳定过表达miR-375,Pdx-1,和MafA对细胞的分化的影响 | 第46-54页 |
| 3.2.3.1 分化各阶段的细胞形态 | 第46-48页 |
| 3.2.3.2 分化各阶段胰腺相关基因的表达情况 | 第48-51页 |
| 3.2.3.3 免疫荧光染色结果 | 第51-53页 |
| 3.2.3.4 ELISA检测胰岛素的分泌 | 第53-54页 |
| 4 讨论 | 第54-56页 |
| 4.1 人脂肪间充质干细胞的分离及鉴定 | 第54-55页 |
| 4.2 过表达MiR-375,Pdx-1和MafA对胰岛素分泌细胞分化的影响 | 第55-56页 |
| 5 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 硕士期间参加项目情况 | 第71页 |
