| 摘要 | 第10-13页 |
| ABSTRACT | 第13-15页 |
| 上篇 文献综述 | 第16-61页 |
| 第一章 枯草芽孢杆菌防治植物病害研究进展 | 第17-25页 |
| 1 枯草芽抱杆菌介绍 | 第17页 |
| 2 防治植物病害的枯草芽孢杆菌农药的使用现状 | 第17-18页 |
| 3 枯草芽孢杆菌防治植物病害的机理 | 第18-20页 |
| 3.1 抑菌作用-拮抗物质 | 第18-19页 |
| 3.2 竞争作用-营养和空间的争夺 | 第19-20页 |
| 3.3 溶菌作用-降解细胞壁 | 第20页 |
| 3.4 诱导寄主植物抗病性 | 第20页 |
| 4 枯草芽孢杆菌防治植物病害分泌的次生代谢产物种类 | 第20-24页 |
| 4.1 核糖体合成途径的羊毛硫抗生素 | 第20-22页 |
| 4.2 非核糖体合成途径的脂肽类抗生素 | 第22-23页 |
| 4.3 其他抑菌次生代谢产物 | 第23-24页 |
| 5 枯草芽孢杆菌防治植物病害的展望 | 第24页 |
| 6 存在的问题与解决方法 | 第24-25页 |
| 第二章 枯草芽孢杆菌产脂肽类抗生素研究进展 | 第25-37页 |
| 1 枯草芽孢杆菌产脂肽类抗生素的种类 | 第25-28页 |
| 1.1 表面活性素Surfactin化学结构 | 第25-26页 |
| 1.2 伊枯草素Iturin化学结构 | 第26-27页 |
| 1.3 泛革素Fengycin化学结构 | 第27-28页 |
| 2 脂肽类抗生素的非核糖体合成机制 | 第28-33页 |
| 2.1 表面活性素Surfactin合成机制 | 第28-29页 |
| 2.2 伊枯草素Iturin合成机制 | 第29-30页 |
| 2.3 泛革素Fengycin合成机制 | 第30-31页 |
| 2.4 特殊的NPRSs合成机制 | 第31-33页 |
| 3 脂肽类抗生素合成代谢相关培养条件及分子调控基因 | 第33-34页 |
| 4 脂肽类抗生素的重要作用 | 第34-37页 |
| 4.1 对病原菌的抑制作用 | 第34页 |
| 4.2 诱导植物抗病性 | 第34-35页 |
| 4.3 影响枯草芽孢杆菌多细胞行为 | 第35-37页 |
| 第三章 枯草芽孢杆菌生物膜研究进展 | 第37-45页 |
| 1 生物膜概念 | 第37页 |
| 2 生物膜的组成成分及形态 | 第37-38页 |
| 3 生物膜的形成过程及影响因素 | 第38-39页 |
| 3.1 生物膜的形成过程 | 第38页 |
| 3.2 生物膜形成的影响因素 | 第38-39页 |
| 4 细菌生物膜的培养方法 | 第39-40页 |
| 4.1 试管静置培养法 | 第39页 |
| 4.2 孔板法 | 第39页 |
| 4.3 内置玻璃片法 | 第39页 |
| 4.4 平板培养法 | 第39-40页 |
| 4.5 环路法 | 第40页 |
| 4.6 其他方法 | 第40页 |
| 5 细菌生物膜的检测方法 | 第40页 |
| 6 细菌生物膜的基因调控网络 | 第40-43页 |
| 6.1 SinR/SinI调控机制 | 第42页 |
| 6.2 SpoOA-KinA-E调控机制 | 第42-43页 |
| 6.3 AbbA/AbrB调控机制 | 第43页 |
| 6.4 独立的YmdB调控机制 | 第43页 |
| 7 芽孢杆菌生物膜在防治病害中的重要作用 | 第43-44页 |
| 8 利用生物膜提高生防细菌对植物病害防效的展望 | 第44页 |
| 9 存在的问题 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-61页 |
| 下篇 研究内容 | 第61-137页 |
| 第一章 Bs916突变体库的构建、抑制水稻细菌性条斑菌和生物膜形成缺陷突变菌株的筛选 | 第63-75页 |
| 1 材料与方法 | 第64-67页 |
| 1.1 供试菌株与培养基 | 第64-65页 |
| 1.2 主要试剂和仪器 | 第65页 |
| 1.3 枯草芽孢杆菌Bs916随机插入突变体库的构建 | 第65-66页 |
| 1.4 抑制水稻细菌性条斑病菌效果变化显著突变株的筛选 | 第66页 |
| 1.5 生物膜形成缺陷突变株的筛选 | 第66页 |
| 1.6 随机插入突变株的PCR验证和Southern杂交验证及位点序列分析 | 第66-67页 |
| 2 结果与分析 | 第67-73页 |
| 2.1 枯草芽孢杆菌Bs916突变体库的构建 | 第67-68页 |
| 2.2 Bs916突变株对水稻细菌性条斑病菌的抑菌活性测定 | 第68-69页 |
| 2.3 Bs916生物膜形成缺陷突变株的筛选 | 第69-70页 |
| 2.4 与野生型菌株相比抑菌活性变化明显突变株的PCR验证 | 第70页 |
| 2.5 Southern Blot验证pMarA质粒插入到枯草芽孢杆菌Bs916染色体 | 第70-71页 |
| 2.6 转座子TnYLB-1插入位点基因的反向PCR克隆 | 第71-73页 |
| 3 讨论 | 第73-74页 |
| 4 本章小结 | 第74-75页 |
| 第二章 Bs916产脂肽类抗生素杆菌霉素L、表面活性素和泛革素的检测及其对水稻纹枯病菌的抑制作用 | 第75-87页 |
| 1 材料与方法 | 第76-79页 |
| 1.1 供试菌株与培养基 | 第76-77页 |
| 1.2 主要试剂和仪器 | 第77页 |
| 1.3 3种脂肽类抗生素的单敲除载体构建及单敲除突变株的获得 | 第77-78页 |
| 1.4 3种脂肽类抗生素突变株对水稻纹枯病菌Rhizoctonia solani的抑菌效果 | 第78页 |
| 1.5 3种脂肽类抗生素产物的粗提与HPLC检测 | 第78页 |
| 1.6 3种脂肽类抗生素粗提产物的质谱鉴定 | 第78-79页 |
| 2 结果与分析 | 第79-83页 |
| 2.1 脂肽类抗生素杆菌霉素L的检测及其抑制R.solani效果 | 第79-80页 |
| 2.2 脂肽类抗生素表面活性素的检测及其抑制R.solani效果 | 第80-81页 |
| 2.3 脂肽类抗生素泛革素的检测及其抑制R.solani效果 | 第81-83页 |
| 3 讨论 | 第83-85页 |
| 4 本章小结 | 第85-87页 |
| 第三章 gltB、fliZ和serA对枯草芽孢杆菌Bs916生物膜形成、定殖能力与对水稻纹枯病防治效果的影响 | 第87-109页 |
| 1 材料与方法 | 第89-95页 |
| 1.1 供试菌株与培养基 | 第89-90页 |
| 1.2 主要试剂和仪器 | 第90页 |
| 1.3 3种调控蛋白单敲除突变株△fliZ,△gltB和△serA的构建及绿色荧光蛋白的标记 | 第90页 |
| 1.4 Bs916及3个突变株中脂肽类抗生素表面活性素、杆菌霉素L和泛革素含量的检测 | 第90-91页 |
| 1.5 △gltB,△fliZ和△serA突变株的生物膜表型检测 | 第91页 |
| 1.6 AgltB,△fliZ和△serA突变株的菌落形态观察 | 第91页 |
| 1.7 △gltB,△fliZ和△serA突变株与Bs916在水稻茎秆上定殖能力的观察 | 第91-92页 |
| 1.8 △gltB,△fliZ和△serA突变株对水稻纹枯病菌抑菌能力的变化 | 第92页 |
| 1.9 △gltB,△fliZ和△serA突变株与Bs916对水稻纹枯病的防治效果测定 | 第92页 |
| 1.10 RT-PCR检测△gltB突变株与Bs916 γ-PGA合成必需基因capB的表达量 | 第92-93页 |
| 1.11 △gltB突变株和Bs916的生物膜形成中谷氨酸利用率HPLC检测 | 第93-94页 |
| 1.12 △gltB突变株和Bs916的生物膜形成中γ-PGA产量HPLC检测 | 第94页 |
| 1.13 △gltB突变株通过外源添加γ-PGA恢复生物膜的形成 | 第94-95页 |
| 1.14 Bs916产生γ-PGA恢复△gltB突变株的生物膜形成 | 第95页 |
| 2 结果与分析 | 第95-105页 |
| 2.1 gltB,fliZ和serA缺失表达影响3种脂肽类抗生素表面活性素、杆菌霉素L和泛革素的产量 | 第95-96页 |
| 2.2 gltB,fliZ和serA缺失表达对Bs916抑制水稻纹枯病菌活性的影响 | 第96-97页 |
| 2.3 gltB,fliZ和serA缺失表达对Bs916生物膜形成的影响 | 第97-98页 |
| 2.4 gltB,fliZ和serA缺失表达对Bs916菌落形态的影响 | 第98-99页 |
| 2.5 gltB,fliZ和serA缺失表达对Bs916在水稻茎秆上定殖能力的影响 | 第99-100页 |
| 2.6 gltB,fliZ和serA缺失表达对Bs916对水稻纹枯病防治效果的影响 | 第100页 |
| 2.7 △gltB和Bs916 capB转录水平的检测 | 第100-101页 |
| 2.8 Bs916和△gltB在生物膜形成过程中谷氨酸和γ-PGA含量的检测 | 第101-102页 |
| 2.9 外源添加γ-PGA恢复△gltB生物膜的形成 | 第102-104页 |
| 2.10 Bs916产生γ-PGA恢复△gltB生物膜的形成 | 第104-105页 |
| 3 讨论 | 第105-107页 |
| 4 本章小结 | 第107-109页 |
| 第四章 转录组技术分析Bs916和突变株△gltB、△fliZ和△serA生物膜形成过程中相关基因和代谢途径差异 | 第109-131页 |
| 1 材料与方法 | 第111-119页 |
| 1.1 供试菌株与培养基 | 第111页 |
| 1.2 主要试剂和仪器 | 第111页 |
| 1.3 Total RNA质检和纯化 | 第111页 |
| 1.4 cDNA文库构建 | 第111-112页 |
| 1.5 文库质检与测序 | 第112-113页 |
| 1.6 生物信息分析流程 | 第113页 |
| 1.7 数据分析及结果展示 | 第113-119页 |
| 2 结果与分析 | 第119-128页 |
| 2.1 Mapping及结果分析 | 第119-120页 |
| 2.2 突变株△gltB、△fliZ和△serA和Bs916的差异表达基因分析 | 第120页 |
| 2.3 差异基因GO富集分析 | 第120-122页 |
| 2.4 差异基因KEGG富集分析 | 第122-125页 |
| 2.5 差异基因聚类分析 | 第125-126页 |
| 2.6 3个突变株和对照菌株Bs916相比转录水平差异较大基因 | 第126页 |
| 2.7 Pathway关键节点基因分析 | 第126-128页 |
| 3 讨论 | 第128-129页 |
| 4 本章小结 | 第129-131页 |
| 参考文献 | 第131-137页 |
| 全文总结 | 第137-139页 |
| 本论文创新点 | 第139-141页 |
| 附录 | 第141-149页 |
| 致谢 | 第149-151页 |
| 攻读博士期间发表的论文和专利 | 第151页 |
