| 致谢 | 第5-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第一章 绪论 | 第14-28页 |
| 1.1 同源重组系统 | 第14-18页 |
| 1.1.1 同源重组简介 | 第14-15页 |
| 1.1.2 Red同源重组系统 | 第15-16页 |
| 1.1.3 Red同源重组的缺陷 | 第16页 |
| 1.1.4 两步无痕重组系统 | 第16-18页 |
| 1.2 阻遏系统 | 第18-20页 |
| 1.2.1 操纵子类阻遏系统 | 第18-19页 |
| 1.2.2 乳糖操纵子 | 第19-20页 |
| 1.3 番茄红素 | 第20-23页 |
| 1.3.1 番茄红素简介 | 第20-21页 |
| 1.3.2 番茄红素的微生物生产 | 第21-22页 |
| 1.3.3 磷酸戊糖途径相关基因talB | 第22-23页 |
| 1.4 人工启动子库 | 第23-25页 |
| 1.4.1 人工启动子构建方法 | 第23-24页 |
| 1.4.2 M1系列启动子库 | 第24-25页 |
| 1.5 本课题基本思路和研究内容 | 第25-28页 |
| 第二章 材料与方法 | 第28-36页 |
| 2.1 实验材料 | 第28-29页 |
| 2.1.1 实验菌株 | 第28页 |
| 2.1.2 质粒 | 第28-29页 |
| 2.1.3 重要试剂、工具酶及试剂盒 | 第29页 |
| 2.1.4 培养基 | 第29页 |
| 2.2 实验仪器 | 第29-30页 |
| 2.3 实验及分析方法 | 第30-36页 |
| 2.3.1 分子克隆实验 | 第30-34页 |
| 2.3.1.1 大肠杆菌质粒抽提 | 第31页 |
| 2.3.1.2 琼脂糖凝胶核酸电泳 | 第31页 |
| 2.3.1.3 胶回收纯化DNA | 第31页 |
| 2.3.1.4 PCR产物回收纯化DNA | 第31页 |
| 2.3.1.5 限制性内切酶酶切 | 第31页 |
| 2.3.1.6 酶切片段的连接 | 第31页 |
| 2.3.1.7 DNA含量测定 | 第31页 |
| 2.3.1.8 细胞密度测定 | 第31-32页 |
| 2.3.1.9 化学转化感受态细胞的制备 | 第32页 |
| 2.3.1.10 化学转化感受态细胞的化学转化 | 第32-33页 |
| 2.3.1.11 电转化感受态细胞的制备 | 第33页 |
| 2.3.1.12 电转化感受态细胞的电转化 | 第33-34页 |
| 2.3.1.13 cat-sacB的两步重组系统 | 第34页 |
| 2.3.2 番茄红素产量测定 | 第34-36页 |
| 2.3.2.1 大肠杆菌中番茄红素的提取与产量测定 | 第34页 |
| 2.3.2.2 番茄红素的标准曲线的测定 | 第34-36页 |
| 第三章 正负筛选标记基因盒与lacI无痕重组本底菌的构建 | 第36-46页 |
| 3.1 引言 | 第36页 |
| 3.2 实验材料 | 第36-38页 |
| 3.2.1 菌株与质粒 | 第36-37页 |
| 3.2.2 相关引物 | 第37-38页 |
| 3.3 实验方法 | 第38-40页 |
| 3.3.1 cat-lacI正负筛选基因盒的构建 | 第38页 |
| 3.3.2 EcHW2f的质粒pAC-LYC的去除 | 第38-39页 |
| 3.3.3 敲除EcNP中的lacI基因及其启动子 | 第39页 |
| 3.3.4 在EcNPL中构建Plac-lacO-kan基因串 | 第39-40页 |
| 3.3.5 tet-lacI正负筛选基因盒的构建 | 第40页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第40-45页 |
| 3.4.1 cat-lacI正负筛选基因盒的构建 | 第40-41页 |
| 3.4.2 EcHW2f的质粒pAC-LYC的去除 | 第41-42页 |
| 3.4.3 EcNP中lacI基因及其启动子的敲除 | 第42-43页 |
| 3.4.4 在EcNPL中构建Plac-lacO-kan基因串 | 第43-44页 |
| 3.4.5 tet-lacI正负筛选基因盒的构建 | 第44-45页 |
| 3.5 本章小结 | 第45-46页 |
| 第四章 lacI无痕重组系统的检验与筛选条件的优化 | 第46-58页 |
| 4.1 引言 | 第46页 |
| 4.2 实验材料 | 第46-47页 |
| 4.2.1 菌株与质粒 | 第46页 |
| 4.2.2 相关引物 | 第46-47页 |
| 4.3 实验方法 | 第47-49页 |
| 4.3.1 检验lacI两步重组系统的有效性 | 第47-48页 |
| 4.3.2 探索筛选阳性克隆所需的合适卡那霉素浓度 | 第48页 |
| 4.3.3 使用cat-lacI正负筛选系统的假阳性率 | 第48页 |
| 4.3.4 番茄红素产量的测定 | 第48-49页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第49-56页 |
| 4.4.1 检验lacI两步重组系统的有效性 | 第49-50页 |
| 4.4.2 探索筛选阳性克隆所需的合适卡那霉素浓度 | 第50-54页 |
| 4.4.3 使用cat-lacI正负筛选系统的假阳性率 | 第54页 |
| 4.4.4 番茄红素标准曲线 | 第54-55页 |
| 4.4.5 番茄红素产量测定 | 第55-56页 |
| 4.5 本章小结 | 第56-58页 |
| 第五章 lacI无痕重组系统在DH5a中的构建 | 第58-64页 |
| 5.1 引言 | 第58页 |
| 5.2 实验材料 | 第58-59页 |
| 5.2.1 菌株与质粒 | 第58页 |
| 5.2.2 相关引物 | 第58-59页 |
| 5.3 实验方法 | 第59-60页 |
| 5.3.1 将质粒pKD46电转入大肠杆菌DH5a | 第59页 |
| 5.3.2 构建重组质粒pMD18-lacZYAI-kan | 第59页 |
| 5.3.3 构建菌株DH5aLK/pKD46 | 第59-60页 |
| 5.4 结果与讨论 | 第60-62页 |
| 5.4.1 重组质粒pMD18-lacZYAI-kan的构建 | 第60-62页 |
| 5.4.2 菌株DH5aLK/pKD46的构建 | 第62页 |
| 5.5 本章小结 | 第62-64页 |
| 第六章 结论与展望 | 第64-66页 |
| 6.1 结论 | 第64-65页 |
| 6.2 展望 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-72页 |
| 作者简介 | 第72页 |
