| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 文献综述 | 第10-16页 |
| 1.1 咖啡碱概况 | 第10-11页 |
| 1.1.1 咖啡碱的分布 | 第10页 |
| 1.1.2 茶树中的咖啡碱 | 第10-11页 |
| 1.1.3 咖啡碱的生理功能 | 第11页 |
| 1.2 茶树咖啡碱的生物合成和代谢途径 | 第11-15页 |
| 1.2.1 咖啡碱的生物合成途径 | 第11-13页 |
| 1.2.2 生物合成途径关键酶的研究进展 | 第13-14页 |
| 1.2.3 咖啡碱的分解代谢 | 第14-15页 |
| 1.3 咖啡碱的综合利用 | 第15页 |
| 1.4 大肠杆菌共表达系统的研究进展 | 第15-16页 |
| 2 引言 | 第16-18页 |
| 2.1 研究目的与意义 | 第16页 |
| 2.2 研究内容 | 第16-17页 |
| 2.2.1 咖啡碱合成酶突变体TMX和CaXMT在pMAL-c5X表达载体中的组合表达 | 第16-17页 |
| 2.2.2 咖啡碱合成酶突变体TMX和CaXMT在pRSF-Duet1表达载体中的组合表达 | 第17页 |
| 2.2.3 咖啡碱生物合成关键酶TIDH的克隆与功能验证 | 第17页 |
| 2.3 技术路线 | 第17-18页 |
| 3 材料与方法 | 第18-29页 |
| 3.1 实验材料 | 第18-19页 |
| 3.1.1 菌株与载体 | 第18页 |
| 3.1.2 试剂与仪器 | 第18-19页 |
| 3.2 方法 | 第19-29页 |
| 3.2.1 TMX基因的克隆、双基因共表达载体构建及体外酶活性验证 | 第19-24页 |
| 3.2.2 CaXMT和TMX在pRSFDuet-1 载体中的组合表达及体外酶活性验证 | 第24-26页 |
| 3.2.3 茶树TIDH基因的克隆及功能验证 | 第26-29页 |
| 4 结果与分析 | 第29-43页 |
| 4.1 TMX基因的克隆、双基因共表达载体构建及体外酶活性验证 | 第29-32页 |
| 4.1.1 TM1/2/3/4 基因ORF的扩增 | 第29页 |
| 4.1.2 pMAL-CaXMT-TM1/2/3/4 表达载体的构建 | 第29-30页 |
| 4.1.3 pMAL-CaXMT-TM1/2/3/4 融合蛋白的诱导表达 | 第30-31页 |
| 4.1.4 pMAL-CaXMT-TM1/2/3/4 体外酶活性分析 | 第31-32页 |
| 4.2 CaXMT和TMX在pRSF-Duet1载体中的组合表达及体外酶活性验证 | 第32-38页 |
| 4.2.1 pRSF-CaXMT-TMX表达载体的构建 | 第32-34页 |
| 4.2.2 pRSF-CaXMT-TMX融合蛋白的诱导表达 | 第34-35页 |
| 4.2.3 目的蛋白的Western-blot鉴定 | 第35页 |
| 4.2.4 融合蛋白的体外酶活性检测 | 第35-38页 |
| 4.3 茶树TIDH基因的克隆及体外酶活性验证 | 第38-43页 |
| 4.3.1 TIDH基因ORF的扩增 | 第38页 |
| 4.3.2 pMAL-TIDH表达载体的构建 | 第38-39页 |
| 4.3.3 TIDH重组蛋白在大肠杆菌中的表达及蛋白纯化 | 第39-40页 |
| 4.3.4 pMAL-TIDH体外酶活性检测分析 | 第40-43页 |
| 5 讨论 | 第43-45页 |
| 5.1 CaXMT和TMX在大肠杆菌表达载体中的组合表达 | 第43页 |
| 5.2 茶树TIDH基因的克隆及表达 | 第43-45页 |
| 6 结论 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-52页 |
| 附录A. 中英文缩写及注释 | 第52-53页 |
| 附录B. TCS1及突变体TMX基因测序结果 | 第53-57页 |
| 附录C. CaXMT和TIDH基因ORF核苷酸序列 | 第57-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 作者简介 | 第60页 |
| 研究生在读期间论文发表情况 | 第60页 |
