| 符号说明 | 第4-10页 |
| 中文摘要 | 第10-11页 |
| Abstract | 第11页 |
| 前言 | 第12-25页 |
| 1.1 古菌及超嗜热古菌Thermococcus sp.4557的概况 | 第12-15页 |
| 1.1.1 古菌 | 第12-14页 |
| 1.1.2 超嗜热微生物 | 第14-15页 |
| 1.2 古菌DNA复制 | 第15-20页 |
| 1.2.1 DNA复制起点 | 第15-16页 |
| 1.2.2 与DNA复制相关蛋白 | 第16-20页 |
| 1.2.3 冈崎片段的形成 | 第20页 |
| 1.3 热稳定DNA聚合酶研究及应用 | 第20-22页 |
| 1.3.1 热稳定DNA聚合酶的研究进展 | 第20-21页 |
| 1.3.2 依赖于热稳定DNA聚合酶PCR技术的应用 | 第21-22页 |
| 1.4 依赖DNA聚合酶的PCR技术在禽白血病病毒研究中的应用 | 第22-23页 |
| 1.5 本研究的立题依据和基本思路 | 第23-25页 |
| 1.5.1 立题依据 | 第23-24页 |
| 1.5.2 基本思路 | 第24-25页 |
| 材料和方法 | 第25-45页 |
| 2.1 材料 | 第25-27页 |
| 2.1.1 实验样品 | 第25页 |
| 2.1.2 菌株和载体 | 第25页 |
| 2.1.3 工具酶及相关试剂 | 第25页 |
| 2.1.4 试剂盒 | 第25-26页 |
| 2.1.5 引物 | 第26-27页 |
| 2.1.6 数据库与主要软件 | 第27页 |
| 2.2 方法 | 第27-45页 |
| 2.2.1 超嗜热古菌Thermococcus sp.4557的培养 | 第27-28页 |
| 2.2.2 超嗜热古菌基因组DNA的提取 | 第28-29页 |
| 2.2.3 目的基因的扩增与His重组表达载体的构建 | 第29-36页 |
| 2.2.3.1 目的基因的扩增与回收 | 第29-31页 |
| 2.2.3.2 线性载体的制备 | 第31页 |
| 2.2.3.3 His-PolD(S)、His-GAN表达载体的构建 | 第31-33页 |
| 2.2.3.4 His-GINS15重组表达载体的构建 | 第33-34页 |
| 2.2.3.5 去除His的GAN和GINS15重组表达载体的构建 | 第34-35页 |
| 2.2.3.6 重组表达载体(质粒)的提取 | 第35-36页 |
| 2.2.4 PolD(L),PolD(S),GAN,GINS15重组蛋白的表达与纯化 | 第36-39页 |
| 2.2.5 Thermococcus sp.4557互作蛋白的鉴定 | 第39-41页 |
| 2.2.5.1 分子筛层析鉴定蛋白互作 | 第39-40页 |
| 2.2.5.2 His-pulldown鉴定蛋白互作 | 第40-41页 |
| 2.2.6 禽白血病病毒EV位点序列的鉴定 | 第41-45页 |
| 2.2.6.1 长距离PCR扩增ALV序列 | 第41页 |
| 2.2.6.2 重组载体的构建 | 第41-44页 |
| 2.2.6.3 基因组序列的比较分析 | 第44-45页 |
| 结果和分析 | 第45-58页 |
| 3.1 超嗜热古菌Thermococcus sp.4557的培养和基因组的提取 | 第45页 |
| 3.2 目的基因的扩增与His重组表达载体的构建 | 第45-49页 |
| 3.2.1 目的基因的扩增与回收 | 第45-47页 |
| 3.2.2 线性载体的制备 | 第47-48页 |
| 3.2.3. His-PolD(L)、His-PolD(S)、His-GAN表达载体的构建 | 第48页 |
| 3.2.4 His-GINS15重组表达载体的构建 | 第48-49页 |
| 3.3 PolD(L)、PolD(S)、GAN、GINS15四个基因的重组蛋白的表达与纯化 | 第49-50页 |
| 3.4 Thermococcus sp.4557互作蛋白的鉴定 | 第50-54页 |
| 3.4.1 分子筛层析鉴定蛋白互作 | 第50-53页 |
| 3.4.2 His-pulldown鉴定蛋白互作 | 第53-54页 |
| 3.5 禽白血病病毒EV位点序列的鉴定 | 第54-58页 |
| 3.5.1 ALV基因组的扩增 | 第54-55页 |
| 3.5.2 重组载体的构建 | 第55页 |
| 3.5.3 对测序的序列的分析 | 第55页 |
| 3.5.4 与原鸡的基因组其他序列的比较 | 第55-56页 |
| 3.5.5 与其它亚群白血病病毒全基因组序列比较分析 | 第56-58页 |
| 4 讨论 | 第58-61页 |
| 4.1 超嗜热古菌 | 第58页 |
| 4.2 超嗜热古菌的DNA复制机制 | 第58-59页 |
| 4.3 使用PolB DNA聚合酶扩增ALV | 第59-61页 |
| 结论 | 第61-62页 |
| 5.1 古菌DNA复制 | 第61页 |
| 5.2 扩增ALV序列 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-70页 |
| 附录 | 第70-79页 |
| 7.1 培养基及主要试剂的配制 | 第70-76页 |
| 7.2 本文所使用的仪器 | 第76-77页 |
| 7.3 本文所涉及到的基因序列代码 | 第77-78页 |
| 7.4 PCR反应体系 | 第78页 |
| 7.5 菌液PCR反应体系 | 第78-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 | 第80页 |
