| 摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-13页 |
| 1 前言 | 第14-19页 |
| 1.1 葡萄糖氧化酶 | 第14-15页 |
| 1.1.1 葡萄糖氧化酶的结构 | 第14页 |
| 1.1.2 葡萄糖氧化酶的酶学性质 | 第14-15页 |
| 1.1.3 葡萄糖氧化酶的抗氧作用机制 | 第15页 |
| 1.2 昆虫体内的葡萄糖氧化酶 | 第15-17页 |
| 1.2.1 昆虫体内的葡萄糖氧化酶的分布 | 第15页 |
| 1.2.2 昆虫体内的葡萄糖氧化酶与昆虫食性 | 第15-16页 |
| 1.2.3 昆虫体内的葡萄糖氧化酶的生理功能 | 第16页 |
| 1.2.4 昆虫体内的葡萄糖氧化酶与植物间的相互作用 | 第16-17页 |
| 1.3 苜蓿夜蛾 | 第17页 |
| 1.4 研究目的与意义 | 第17-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-37页 |
| 2.1 试验昆虫 | 第19页 |
| 2.2 试验所用仪器 | 第19页 |
| 2.3 试验所用试剂 | 第19-20页 |
| 2.4 苜蓿夜蛾葡萄糖氧化酶基因的克隆 | 第20-26页 |
| 2.4.1 RNA的提取 | 第20页 |
| 2.4.2 第一条链c DNA的合成 | 第20-21页 |
| 2.4.3 葡萄糖氧化酶基因片段的克隆 | 第21-23页 |
| 2.4.4 葡萄糖氧化酶基因c DNA序列的全长获得 | 第23-26页 |
| 2.5 序列分析 | 第26-27页 |
| 2.6 葡萄糖氧化酶基因的原核表达、活性测定及抑菌圈试验 | 第27-32页 |
| 2.6.1 原核表达载体的构建 | 第27-29页 |
| 2.6.2 重组质粒的转化与重组蛋白的诱导 | 第29-30页 |
| 2.6.3 重组蛋白的变性、纯化与复性 | 第30-31页 |
| 2.6.4 蛋白浓度的测定 | 第31页 |
| 2.6.5 葡萄糖氧化酶重组蛋白的活性测定 | 第31页 |
| 2.6.6 抑菌圈试验 | 第31-32页 |
| 2.7 葡萄糖氧化酶的特性研究 | 第32-34页 |
| 2.7.1 葡萄糖氧化酶基因在不同组织中的差异性表达分析 | 第32页 |
| 2.7.2 葡萄糖氧化酶基因在不同浓度葡萄糖诱导下的表达模式分析 | 第32页 |
| 2.7.3 葡萄糖氧化酶基因在饥饿处理下的表达模式分析 | 第32页 |
| 2.7.4 荧光定量PCR (Real-time PCR) | 第32-34页 |
| 2.8 葡萄糖氧化酶基因的RNAi的研究 | 第34-37页 |
| 2.8.1 RNAi的引物设计 | 第34页 |
| 2.8.2 体外合成葡萄糖氧化酶基因的ds RNA | 第34-36页 |
| 2.8.3 体外注射ds RNA | 第36-37页 |
| 3 结果分析 | 第37-55页 |
| 3.1 苜蓿夜蛾葡萄糖氧化酶基因的克隆 | 第37-38页 |
| 3.1.1 苜蓿夜蛾总RNA的提取 | 第37页 |
| 3.1.2 葡萄糖氧化酶基因c DNA的克隆 | 第37-38页 |
| 3.2 葡萄糖氧化酶c DNA序列分析 | 第38-40页 |
| 3.3 葡萄糖氧化酶的氨基酸序列分析 | 第40-42页 |
| 3.3.1 信号肽的预测 | 第40页 |
| 3.3.2 葡萄糖氧化酶基因N-糖基化位点的预测 | 第40-41页 |
| 3.3.3 葡萄糖氧化酶蛋白三维模型构建 | 第41-42页 |
| 3.4 葡萄糖氧化酶基因的同源性比较和系统进化树的构建 | 第42-45页 |
| 3.4.1 氨基酸序列同源性的比较 | 第42-44页 |
| 3.4.2 系统进化树的构建 | 第44-45页 |
| 3.5 葡萄糖氧化酶基因的原核表达、活性测定及抑菌圈试验 | 第45-49页 |
| 3.5.1 原核表达载体的构建 | 第45-46页 |
| 3.5.2 表达蛋白的可溶性分析 | 第46页 |
| 3.5.3 重组蛋白的纯化和复性 | 第46-47页 |
| 3.5.4 蛋白浓度的测定 | 第47-48页 |
| 3.5.5 重组蛋白的活性测定 | 第48页 |
| 3.5.6 葡萄糖氧化酶的抑菌作用 | 第48-49页 |
| 3.6 葡萄糖氧化酶的特性研究 | 第49-53页 |
| 3.6.1 荧光定量PCR引物的筛选 | 第49-50页 |
| 3.6.2 葡萄糖氧化酶基因mRNA在虫体中不同组织中的表达 | 第50-51页 |
| 3.6.3 葡萄糖氧化酶在不同浓度葡萄糖诱导下的表达模式分析 | 第51-52页 |
| 3.6.4 饥饿处理对葡萄糖氧化酶基因的表达量影响 | 第52-53页 |
| 3.7 葡萄糖氧化酶基因RNAi的研究 | 第53-55页 |
| 3.7.1 GOX dsRNA的合成 | 第53-54页 |
| 3.7.2 RNAi处理对GOX表达量的影响 | 第54-55页 |
| 4 讨论 | 第55-60页 |
| 4.1 HvGOX基因的克隆和序列分析 | 第55-56页 |
| 4.2 HvGOX基因的原核表达、活性测定和抑菌圈试验 | 第56-57页 |
| 4.3 HvGOX基因的特性研究 | 第57-58页 |
| 4.4 HvGOX基因RNA干扰的研究 | 第58-60页 |
| 5 结论 | 第60-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-68页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第68页 |
