| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 第一章 锌指蛋白及锌指核酸酶的设计 | 第12-26页 |
| 摘要 | 第12页 |
| 1. 前言 | 第12-13页 |
| 2. 实验方法 | 第13-15页 |
| 3. 结果 | 第15-23页 |
| ·以TMEM18为靶设计的锌指 | 第15-16页 |
| ·锌指的特异性的初步分析 | 第16-19页 |
| ·锌指蛋白DNA结合结构域的设计 | 第19页 |
| ·锌指核酸酶的设计 | 第19-23页 |
| 4. 讨论 | 第23-26页 |
| 第二章 表达人工锌指核酸酶质粒的构建 | 第26-48页 |
| 摘要 | 第26页 |
| 1. 前言 | 第26-27页 |
| 2. 材料与方法 | 第27-43页 |
| 3. 结果 | 第43-47页 |
| ·pNfokI1T质粒的构建 | 第43-45页 |
| ·p2NfokIT的构建 | 第45页 |
| ·两个锌指蛋白的DNA结合结构域ZF1和ZF2的合成 | 第45页 |
| ·质粒p2NfokIT/2ZF的构建 | 第45-46页 |
| ·质粒p2NfokIT/2ZF-6His的构建 | 第46-47页 |
| 4. 讨论 | 第47-48页 |
| 第三章 人工锌指核酸酶在细胞水平的验证 | 第48-60页 |
| 摘要 | 第48页 |
| 1. 前言 | 第48-50页 |
| 2. 材料与方法 | 第50-56页 |
| 3. 结果 | 第56-59页 |
| ·eGFP突变质粒pMeGFP与供体质粒pddeGFP的构建 | 第56-58页 |
| ·锌指核酸酶的活性 | 第58-59页 |
| 4. 讨论 | 第59-60页 |
| 第四章 睾丸介导人工锌指核酸酶敲除小鼠精子的TMEM18基因 | 第60-79页 |
| 摘要 | 第60-61页 |
| 1. 前言 | 第61页 |
| 2. 材料与方法 | 第61-71页 |
| 3. 实验结果 | 第71-77页 |
| ·TMEM18蛋白在小鼠睾丸和精子中的表达 | 第71-73页 |
| ·不同转染条件下,ZFN对睾丸和附睾中TMEM18打靶的影响 | 第73页 |
| ·ZFN敲除小鼠睾丸和成熟精子中的TMEM18 | 第73-75页 |
| ·敲除TMEM18影响Wnt信号通路和胰岛素信号通路 | 第75-77页 |
| 4. 讨论 | 第77-79页 |
| 第五章 文献综述 | 第79-87页 |
| 参考文献 | 第87-91页 |
| 已发表和待发表论文 | 第91-92页 |
| 附录 | 第92-96页 |
| 致谢 | 第96页 |
