| 致谢 | 第7-8页 |
| 摘要 | 第8-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-24页 |
| 1.1 丁香假单胞菌与番茄细菌性斑点病 | 第17-18页 |
| 1.2 病原菌入侵与植物免疫防御 | 第18-19页 |
| 1.3 丁香假单胞菌抗性蛋白Pto | 第19-20页 |
| 1.4 Pto互作蛋白 | 第20-21页 |
| 1.5 农杆菌介导的植物基因转化 | 第21-24页 |
| 第二章 材料与方法 | 第24-45页 |
| 2.1 实验材料 | 第24页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第24页 |
| 2.1.2 质粒与菌株 | 第24页 |
| 2.2 主要仪器设备 | 第24-26页 |
| 2.3 主要相关试剂 | 第26-27页 |
| 2.3.1 分子生物学实验常用酶 | 第26页 |
| 2.3.2 常用试剂药品及试剂盒 | 第26-27页 |
| 2.4 常用试剂 | 第27-28页 |
| 2.4.1 LB培养基 | 第27页 |
| 2.4.2 SOC培养基 | 第27页 |
| 2.4.3 TAE电泳胶缓冲液 | 第27页 |
| 2.4.4 聚丙烯酰胺凝胶 | 第27-28页 |
| 2.4.5 蛋白质上样缓冲液 | 第28页 |
| 2.4.6 蛋白质电泳缓冲液 | 第28页 |
| 2.4.7 Western blot转膜缓冲液 | 第28页 |
| 2.4.8 TBST（Trish-buffered saline with Tween）缓冲液 | 第28页 |
| 2.4.9 植物DNA提取液 | 第28页 |
| 2.5 烟草瞬时表达相关试剂 | 第28-29页 |
| 2.5.1 IM溶液 | 第28-29页 |
| 2.5.2 20×AB盐溶液 | 第29页 |
| 2.5.3 乙酰丁香酮 | 第29页 |
| 2.5.4 诱导培养基 | 第29页 |
| 2.5.5 蛋白质提取缓冲液 | 第29页 |
| 2.6 番茄遗传转化相关试剂 | 第29-34页 |
| 2.6.1 MS培养基 | 第29-31页 |
| 2.6.2 组织培养所需激素、抗生素等的配制 | 第31页 |
| 2.6.3 番茄组织培养所用培养液、培养基 | 第31-34页 |
| 2.7 分子生物学实验方法 | 第34-41页 |
| 2.7.1 引物设计 | 第34-36页 |
| 2.7.2 番茄总RNA提取 | 第36页 |
| 2.7.3 反转录 | 第36-37页 |
| 2.7.4 PCR反应 | 第37页 |
| 2.7.5 琼脂糖凝胶电泳 | 第37页 |
| 2.7.6 连接与转化 | 第37-38页 |
| 2.7.7 大肠杆菌感受态细胞制备 | 第38页 |
| 2.7.8 质粒提取 | 第38-39页 |
| 2.7.9 质粒酶切 | 第39页 |
| 2.7.10 DNA片段胶回收 | 第39-40页 |
| 2.7.11 基因测序 | 第40页 |
| 2.7.12 农杆菌感受态细胞制备与转化 | 第40-41页 |
| 2.7.12.1 农杆菌感受态制备 | 第40-41页 |
| 2.7.12.2 农杆菌转化 | 第41页 |
| 2.8 目的基因在烟草叶片中瞬时表达 | 第41-42页 |
| 2.9 免疫共沉淀 | 第42页 |
| 2.10 番茄遗传转化 | 第42-43页 |
| 2.10.1 获得无菌幼苗 | 第42-43页 |
| 2.10.2 愈伤组织预培养 | 第43页 |
| 2.10.3 农杆菌侵染 | 第43页 |
| 2.10.4 卡那霉素抗性梯度筛选 | 第43页 |
| 2.10.5 愈伤组织分化 | 第43页 |
| 2.10.6 愈伤组织生根培养 | 第43页 |
| 2.11 转基因植株鉴定与抗病表型分析 | 第43-45页 |
| 2.11.1 转基因植株DNA提取 | 第43-44页 |
| 2.11.2 转基因植株阳性鉴定 | 第44页 |
| 2.11.3 病原菌接种 | 第44页 |
| 2.11.4 叶片菌落计数 | 第44-45页 |
| 第三章 实验结果与分析 | 第45-59页 |
| 3.1 Pti基因植物瞬时表达载体构建与表达 | 第45-47页 |
| 3.1.1 番茄Pti基因扩增 | 第45页 |
| 3.1.2 pBTEX-Pti-FLAG载体构建 | 第45-46页 |
| 3.1.3 Pti4、Pti5和Pti6蛋白的植物体内瞬时表达 | 第46-47页 |
| 3.2 Pti蛋白与番茄抗病蛋白的相互作用 | 第47-50页 |
| 3.2.1 Pti与Pto蛋白的相互作用 | 第47-49页 |
| 3.2.2 Pti与AvrPtoB蛋白的相互作用 | 第49-50页 |
| 3.3 Pti植物遗传转化表达载体构建 | 第50-52页 |
| 3.3.1 pEASY-Blunt-Pti中间载体构建 | 第50-51页 |
| 3.3.2 pBI121-Pti表达载体构建 | 第51-52页 |
| 3.3.3 pBI121-Pti载体转化农杆菌EHA105 | 第52页 |
| 3.4 Pti4、Pti5基因遗传转化 | 第52-55页 |
| 3.4.1 预培养和共培养 | 第52-53页 |
| 3.4.2 转化组织的筛选分化 | 第53-54页 |
| 3.4.3 生根培养 | 第54-55页 |
| 3.5 转基因植株鉴定与表型分析 | 第55-59页 |
| 3.5.1 转基因植株鉴定 | 第55-56页 |
| 3.5.1.1 NPTII筛选标记基因扩增 | 第55页 |
| 3.5.1.2 Pti4、Pti5表达水平半定量RT-PCR分析 | 第55-56页 |
| 3.5.2 转基因植株抗病表型分析 | 第56-59页 |
| 第四章 结论与讨论 | 第59-62页 |
| 4.1 结论 | 第59-60页 |
| 4.1.1 Pti蛋白在植物体内与Pto、AvrPtoB相互作用 | 第59页 |
| 4.1.2 Pti4、Pti5过表达转基因植株增强番茄对丁香假单胞菌的抗性 | 第59-60页 |
| 4.2 讨论与展望 | 第60-62页 |
| 参考文献 | 第62-71页 |
| 硕士期间发明专利与发表论文 | 第71-72页 |
