| 摘要 | 第9-11页 |
| ABSTRACT | 第11-12页 |
| 英文缩略词表 | 第13-14页 |
| 第一章 副流感病毒3型病原学及诊断方法研究进展 | 第14-26页 |
| 1 PIV3的形态特征及理化特性 | 第14-15页 |
| 1.1 PIV3的形态特征 | 第14-15页 |
| 1.2 PIV3的理化特性 | 第15页 |
| 2 PIV3的基因组及编码蛋白 | 第15-17页 |
| 2.1 PIV3的基因组 | 第15页 |
| 2.2 NP蛋白 | 第15-16页 |
| 2.3 P蛋白 | 第16页 |
| 2.4 M蛋白 | 第16-17页 |
| 2.5 F蛋白 | 第17页 |
| 2.6 HN蛋白 | 第17页 |
| 2.7 L蛋白 | 第17页 |
| 3 PIV3的复制 | 第17-18页 |
| 4 PIV3的临床症状和病理变化 | 第18-19页 |
| 5 PIV3的诊断 | 第19-21页 |
| 5.1 PIV3的病原学诊断 | 第19-20页 |
| 5.1.1 病毒的分离 | 第19页 |
| 5.1.2 病毒的RT-PCR检测 | 第19-20页 |
| 5.2 PIV3的血清学诊断 | 第20-21页 |
| 5.2.1 血凝(HA)和血凝抑制试验(H1) | 第20页 |
| 5.2.2 病毒中和试验(VN) | 第20-21页 |
| 参考文献 | 第21-26页 |
| 第二章 山羊副流感病毒3型JS2013株的分离鉴定 | 第26-38页 |
| 1 材料 | 第26-27页 |
| 1.1 病料来源和细胞 | 第26页 |
| 1.2 主要试剂 | 第26-27页 |
| 1.3 主要仪器 | 第27页 |
| 1.4 主要溶液的配置 | 第27页 |
| 1.4.1 50×TAE(贮存液) | 第27页 |
| 1.4.2 1%琼脂糖凝胶 | 第27页 |
| 2 方法 | 第27-31页 |
| 2.1 细胞的培养 | 第27页 |
| 2.2 病料的处理 | 第27-28页 |
| 2.3 病毒分离与传代 | 第28页 |
| 2.4 病毒N基因序列测定与进化分析 | 第28-30页 |
| 2.4.1 引物的设计与合成 | 第28页 |
| 2.4.2 病毒RNA的提取 | 第28-29页 |
| 2.4.3 RT-PCR扩增病毒的目的基因 | 第29页 |
| 2.4.4 病毒目的基因的回收纯化 | 第29-30页 |
| 2.5 病毒的蚀斑纯化 | 第30页 |
| 2.6 病毒效价的测定(TCID_(50)的测定) | 第30页 |
| 2.7 病毒血凝效价的测定 | 第30-31页 |
| 2.8 病毒理化性质的鉴定试验 | 第31页 |
| 2.8.1 乙醚敏感性试验 | 第31页 |
| 2.8.2 胰蛋白酶敏感性试验 | 第31页 |
| 2.8.3 热敏感性试验 | 第31页 |
| 3 结果与分析 | 第31-34页 |
| 3.1 CPIV3 JS2013株的分离培养结果 | 第31-32页 |
| 3.2 N基因测序与进化分析 | 第32-33页 |
| 3.3 病毒蚀斑纯化的结果 | 第33页 |
| 3.4 病毒效价的测定结果 | 第33-34页 |
| 3.5 血凝试验结果 | 第34页 |
| 3.6 病毒理化特性的试验结果 | 第34页 |
| 3.6.1 乙醚敏感性试验 | 第34页 |
| 3.6.2 胰蛋白酶敏感性试验 | 第34页 |
| 3.6.3 热敏感性试验 | 第34页 |
| 4 讨论 | 第34-36页 |
| 参考文献 | 第36-38页 |
| 第三章 山羊副流感病毒3型(CPIV3) JS2013株对豚鼠致病性的研究 | 第38-50页 |
| 1 材料 | 第38-39页 |
| 1.1 病毒和实验动物 | 第38-39页 |
| 1.2 主要试剂 | 第39页 |
| 1.3 主要试验仪器 | 第39页 |
| 2 方法 | 第39-42页 |
| 2.1 实验动物分组及病毒感染程序 | 第39页 |
| 2.2 引物的设计与合成 | 第39-40页 |
| 2.3 RNA的提取 | 第40页 |
| 2.4 RT-PCR检测 | 第40-41页 |
| 2.5 病毒目的基因的回收纯化 | 第41页 |
| 2.6 病理学检测 | 第41页 |
| 2.7 血凝抑制试验 | 第41-42页 |
| 3 结果 | 第42-45页 |
| 3.1 临床症状 | 第42页 |
| 3.2 病毒的RT-PCR检测与病毒分离 | 第42-43页 |
| 3.3 实验豚鼠解剖学病理变化 | 第43-44页 |
| 3.4 实验豚鼠组织病理学检测 | 第44-45页 |
| 3.5 血凝抑制试验 | 第45页 |
| 4 讨论 | 第45-47页 |
| 参考文献 | 第47-50页 |
| 第四章 山羊副流感病毒3型(CPIV3) JS2013株核衣壳蛋白部分片段的原核表达 | 第50-72页 |
| 1 材料 | 第50-55页 |
| 1.1 毒株与细胞 | 第50页 |
| 1.2 实验动物 | 第50页 |
| 1.3 载体与宿主菌 | 第50-51页 |
| 1.4 主要试剂 | 第51页 |
| 1.5 主要溶液的配制 | 第51-55页 |
| 1.5.1 LB液体培养基 | 第51页 |
| 1.5.2 Amp抗性的LB液体培养基 | 第51页 |
| 1.5.3 Amp抗性的LB固体培养基 | 第51-52页 |
| 1.5.4 50×TAE(贮存液) | 第52页 |
| 1.5.5 1%琼脂糖凝胶 | 第52页 |
| 1.5.6 30%丙烯酰胺溶液 | 第52页 |
| 1.5.7 2×SDS-PAGE Loading Buffer | 第52-53页 |
| 1.5.8 12%SDS-PAGE分离胶 | 第53页 |
| 1.5.9 5%SDS-PAGE浓缩胶 | 第53页 |
| 1.5.10 考马斯亮蓝液 | 第53-54页 |
| 1.5.11 考马斯亮蓝脱色液 | 第54页 |
| 1.5.12 转印缓冲液 | 第54页 |
| 1.5.13 0.15M PBS(PH7.4) | 第54-55页 |
| 1.5.14 PBST洗液 | 第55页 |
| 1.5.15 BSA封闭液 | 第55页 |
| 1.6 主要实验仪器 | 第55页 |
| 2 方法 | 第55-63页 |
| 2.1 引物设计与合成 | 第55页 |
| 2.2 RNA的提取 | 第55-56页 |
| 2.3 病毒核酸的RT-PCR扩增 | 第56页 |
| 2.4 目的基因的回收纯化 | 第56-57页 |
| 2.5 目的基因与pMD18-T载体的连接 | 第57页 |
| 2.6 重组质粒的转化 | 第57-58页 |
| 2.7 菌液PCR | 第58页 |
| 2.8 重组质粒的抽提 | 第58-59页 |
| 2.9 重组质粒的酶切鉴定 | 第59页 |
| 2.10 重组质粒的DNA序列测定 | 第59页 |
| 2.11 N基因原核表达质粒的构建 | 第59-61页 |
| 2.11.1 目的基因与原核表达载体的双酶切 | 第59-60页 |
| 2.11.2 目的基因与载体的连接 | 第60页 |
| 2.11.3 连接产物的转化 | 第60页 |
| 2.11.4 菌液PCR | 第60-61页 |
| 2.11.5 重组质粒的抽提 | 第61页 |
| 2.11.6 重组质粒的酶切鉴定 | 第61页 |
| 2.11.7 重组质粒的DNA序列测定 | 第61页 |
| 2.12 N蛋白的诱导表达及鉴定 | 第61-63页 |
| 2.12.1 阳性重组质粒转化表达宿主菌 | 第61页 |
| 2.12.2 目的蛋白的诱导表达 | 第61页 |
| 2.12.3 重组蛋白重组蛋白表达形式的确定 | 第61-62页 |
| 2.12.4 SDS-PAGE电泳检测 | 第62-63页 |
| 2.12.5 Western-blotting鉴定 | 第63页 |
| 2.13 多克隆抗体的制备与检测 | 第63页 |
| 3 结果与分析 | 第63-69页 |
| 3.1 RT-PCR产物电泳检测结果 | 第63-64页 |
| 3.2 菌液PCR结果 | 第64页 |
| 3.3 重组克隆质粒酶切鉴定结果 | 第64-65页 |
| 3.4 序列测定结果 | 第65页 |
| 3.5 原核表达重组质粒的构建 | 第65-66页 |
| 3.6 目的基因的表达结果 | 第66-67页 |
| 3.7 重组蛋白表达形式的确定 | 第67页 |
| 3.8 重组蛋白的Western-Blot分析 | 第67-68页 |
| 3.9 重组蛋白的抗原性分析 | 第68页 |
| 3.10 多克隆抗体的特异性分析 | 第68-69页 |
| 4 讨论 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-72页 |
| 全文总结 | 第72-74页 |
| 致谢 | 第74页 |
