水稻纹枯病菌菌核形成过程中特异基因的表达与分析
| 致谢 | 第1-10页 |
| 摘要 | 第10-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 1. 文献综述 | 第13-21页 |
| ·水稻纹枯病发生与危害 | 第13-14页 |
| ·水稻纹枯病的症状 | 第14页 |
| ·水稻纹枯病与立枯丝核菌 | 第14-18页 |
| ·病原菌及其分类 | 第14-15页 |
| ·病原菌感染机制 | 第15页 |
| ·菌核的发育过程及形成机理研究 | 第15-17页 |
| ·水稻纹枯病致病分子生物学面临的挑战 | 第17-18页 |
| ·抑制消减杂交技术(SSH)原理及进展 | 第18-21页 |
| 2. 项目研究目标及技术流程 | 第21-23页 |
| ·项目研究目标 | 第21页 |
| ·项目技术流程 | 第21-22页 |
| ·拟解决的关键问题 | 第22-23页 |
| 3. 材料与方法 | 第23-43页 |
| ·主要仪器 | 第23页 |
| ·主要试剂 | 第23-24页 |
| ·实验方法 | 第24-43页 |
| ·主要溶液的配置方法 | 第24-26页 |
| ·材料来源与选择 | 第26-27页 |
| ·改良Trizol法提取总RNA | 第27页 |
| ·mRNA分离纯化 | 第27-28页 |
| ·cDNA第一链及第二链合成 | 第28-29页 |
| ·Rsa-Ⅰ消化 | 第29-30页 |
| ·Adaptor连接 | 第30-32页 |
| ·Adaptor连接效率分析 | 第32-33页 |
| ·第一次杂交 | 第33-34页 |
| ·第二次杂交 | 第34-35页 |
| ·消减PCR反应 | 第35-37页 |
| ·已消减cDNA片段与pMD-18T载体连接 | 第37-38页 |
| ·重组质粒转化感受态细菌 | 第38页 |
| ·重组克隆进行蓝白筛选 | 第38页 |
| ·质粒DNA的少量快速提取—碱裂解法 | 第38-39页 |
| ·目的基因扩增鉴定差异片段 | 第39-40页 |
| ·部分克隆测序 | 第40页 |
| ·Virtual Northern Blot分析 | 第40-42页 |
| ·序列同源性分析 | 第42-43页 |
| 4. 结果与分析 | 第43-53页 |
| ·水稻纹枯病原菌培养特征 | 第43页 |
| ·总RNA质量检测 | 第43-44页 |
| ·cDNA合成及Rsa-Ⅰ酶切 | 第44-45页 |
| ·接头连接效率的检测 | 第45-46页 |
| ·抑制性PCR结果分析 | 第46页 |
| ·重组质粒构建和目的片段扩增 | 第46-49页 |
| ·部分克隆测序 | 第49页 |
| ·Virtual Northern Blot分析 | 第49-50页 |
| ·ESTs序列测定及生物信息学分析 | 第50-53页 |
| 5. 讨论 | 第53-55页 |
| 6. 工作总结 | 第55-56页 |
| 7. 工作展望 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-62页 |
