| 致谢 | 第1-8页 |
| 目录 | 第8-11页 |
| 摘要 | 第11-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-26页 |
| 1. 稻瘟病概述 | 第14-15页 |
| ·稻瘟病及病原病菌 | 第14页 |
| ·稻瘟病的侵染循环 | 第14-15页 |
| 2. 稻瘟病菌效应分子和无毒基因的研究进展 | 第15-18页 |
| ·稻瘟病菌效应分子和无毒基因 | 第15-16页 |
| ·已鉴定和克隆的稻瘟病菌无毒基因 | 第16-18页 |
| ·稻瘟病菌无毒基因克隆方法 | 第18页 |
| 3. 稻瘟病菌无毒基因图位克隆 | 第18-22页 |
| ·建立一个能够区分无毒基因有无的遗传分离群体 | 第18-19页 |
| ·寻找与无毒基因紧密连锁的分子标记 | 第19页 |
| ·构建含有较大插入片段的基因组文库 | 第19-20页 |
| ·用遗传作图和物理作图将目标基因定位在染色体的特定位置 | 第20-21页 |
| ·构建重叠克隆群 | 第21页 |
| ·染色体步移、登陆 | 第21-22页 |
| ·目标基因的鉴定 | 第22页 |
| 4. 稻瘟病菌无毒基因的分子标记与定位 | 第22-24页 |
| 5. 本研究的目的内容和技术路线 | 第24-26页 |
| 第二章 材料与方法 | 第26-42页 |
| 1. 实验材料 | 第26-33页 |
| ·实验菌株 | 第26页 |
| ·质粒载体 | 第26-27页 |
| ·水稻、大麦致病性测定品种 | 第27-30页 |
| ·水稻近等基因系品种 | 第28-29页 |
| ·部分籼稻和粳稻品种 | 第29页 |
| ·感病大麦品种为Golden Promise | 第29-30页 |
| ·各类培养基、抗生素及工具酶 | 第30-32页 |
| ·培养基 | 第30-31页 |
| ·各类抗生素 | 第31-32页 |
| ·工具酶 | 第32页 |
| ·各类生化试剂、溶液及试剂盒 | 第32-33页 |
| 2 稻瘟病菌生物学性状测定试验 | 第33-36页 |
| ·菌落生长速度及菌落特性 | 第33页 |
| ·稻瘟病菌产孢培养和产孢量 | 第33页 |
| ·附着胞形成实验 | 第33-34页 |
| ·稻瘟病菌有性生殖实验 | 第34页 |
| ·稻瘟病菌单孢分离实验 | 第34-35页 |
| ·大麦和水稻离体接种 | 第35页 |
| ·洋葱表皮穿透实验 | 第35页 |
| ·稻瘟病菌菌丝、分生孢子和附着孢的GFP观察 | 第35-36页 |
| 3 各类PCR反应 | 第36-37页 |
| ·常规PCR反应体系 | 第36页 |
| ·细菌菌落PCR反应体系 | 第36-37页 |
| 4. 质粒DNA、基因组DNA及小片段DNA相关操作 | 第37-39页 |
| ·质粒DNA提取 | 第37页 |
| ·基因组DNA抽提 | 第37-38页 |
| ·DNA酶切 | 第38页 |
| ·胶回收 | 第38-39页 |
| ·酶切DNA片段的去磷酸化 | 第39页 |
| ·连接反应 | 第39页 |
| 5. 细菌和真菌转化 | 第39-42页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞制备及细菌转化 | 第39-40页 |
| ·稻瘟病菌原生质体制备与转化 | 第40-42页 |
| 第三章 结果与分析 | 第42-66页 |
| 1. 稻瘟病菌效应分子基因对BAX诱导的细胞死亡的抑制作用的分析 | 第42页 |
| 2. 目的基因过表达载体的构建和转基因稻瘟病菌菌株的制备 | 第42-44页 |
| ·目的基因过表达载体的构建 | 第42-43页 |
| ·目的基因转过表达稻瘟病菌菌株的制备 | 第43-44页 |
| 3. 效应分子基因编码序列和启动子序列的多态性分析 | 第44-50页 |
| ·Pot3转座子的多态性分析 | 第45-46页 |
| ·目的基因编码区序列多态性 | 第46页 |
| ·目的基因启动子区序列多态 | 第46-48页 |
| ·Pot3转座子功能验证 | 第48-50页 |
| 4. P2_2484基因敲除及突变体菌株性状 | 第50-54页 |
| ·P2_2484基因敲除载体构建 | 第50-51页 |
| ·P2_2484突变体的获得 | 第51页 |
| ·P2_2484敲除突变体和过表达突变体的性状比较分析 | 第51-54页 |
| ·P2_2484敲除突变体和过表达突变体的菌落形态 | 第51-52页 |
| ·P2_2484敲除突变体和过表达突变体的生长速度 | 第52-53页 |
| ·P2_2484敲除突变体和过表达突变体的孢子形态 | 第53-54页 |
| ·P2_2484敲除突变体和过表达突变体的致病性分析 | 第54页 |
| 5. P1_3119基因敲除及突变体菌株性状 | 第54-58页 |
| ·P1_3119基因敲除载体构建 | 第54-55页 |
| ·P1_3119突变体的获得 | 第55-56页 |
| ·P1_3119敲除突变体和过表达突变体的性状分析 | 第56-58页 |
| ·P1_3119突变体的菌落形态、孢子形态和生长速度 | 第56页 |
| ·P13119敲除突变体和过表达突变体的附着胞萌发 | 第56-57页 |
| ·P1_3119敲除突变体和过表达突变体的有性生殖 | 第57页 |
| ·P1_3119敲除突变体和过表达突变体的致病性分析 | 第57-58页 |
| 6. 稻瘟病菌株P131和S1528杂交后代无毒基因分子标记 | 第58-66页 |
| ·P131和S1528有性杂交和后代子囊孢子的分离 | 第58-59页 |
| ·筛选对亲本P131和S1528致病性差异的水稻品种 | 第59-61页 |
| ·喷雾接种法筛选致病性差异的水稻品种 | 第59-61页 |
| ·离体叶片接种法筛选致病性差异的水稻品种 | 第61页 |
| ·水稻致病性测定条件的优化 | 第61-62页 |
| ·P131和S1528有性杂交后代子囊孢子的致病性测定 | 第62-63页 |
| ·P131和S1528有性杂交后代子囊孢子的抗池和感池的鉴定 | 第63页 |
| ·筛选对亲本P131和S1528致病性差异的PATE引物 | 第63-64页 |
| ·无毒菌株特异片段的克隆、鉴定及测序 | 第64-66页 |
| 第四章 全文总结讨论及后续研究 | 第66-69页 |
| 1. 全文总结讨论 | 第66-68页 |
| 2. 后续的研究 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-75页 |
| 附表 | 第75-77页 |
