| 摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-13页 |
| 第一章 绪论 | 第14-55页 |
| 1.1 DNA/RNA修饰概述 | 第14页 |
| 1.2 DNA修饰 | 第14-20页 |
| 1.2.1 DNA胞嘧啶甲基化修饰 | 第15-17页 |
| 1.2.2 DNA腺嘌呤甲基化修饰 | 第17-20页 |
| 1.3 RNA修饰 | 第20-27页 |
| 1.3.1 RNA胞嘧啶甲基化修饰 | 第21-23页 |
| 1.3.2 RNA腺嘌呤甲基化修饰 | 第23-27页 |
| 1.4 DNA/RNA修饰分析方法 | 第27-39页 |
| 1.4.1 薄层色谱分析方法 | 第27-29页 |
| 1.4.2 基于限制性内切酶的分析方法 | 第29-30页 |
| 1.4.3 基于免疫化学的分析方法 | 第30-31页 |
| 1.4.4 液相色谱检测法 | 第31-32页 |
| 1.4.5 毛细管电泳分析法 | 第32-34页 |
| 1.4.6 气相色谱-质谱联用分析法 | 第34-35页 |
| 1.4.7 液相色谱-质谱联用分析法 | 第35-37页 |
| 1.4.8 化学标记法 | 第37-39页 |
| 1.5 论文的选题依据、意义及研究内容 | 第39-40页 |
| 参考文献 | 第40-55页 |
| 第二章 DNA中腺嘌呤甲基化分析及功能研究 | 第55-75页 |
| 2.1 前言 | 第55-57页 |
| 2.2 实验部分 | 第57-61页 |
| 2.2.1 化学试剂 | 第57页 |
| 2.2.2 生物样本及DNA提取 | 第57-58页 |
| 2.2.3 降低或过表达FTO基因 | 第58页 |
| 2.2.4 DNA酶解 | 第58-59页 |
| 2.2.5 LC-ESI-MS/MS分析 | 第59-60页 |
| 2.2.6 色谱保留行为确认m~6dA | 第60-61页 |
| 2.2.7 高分辨质谱分析确认m~6dA | 第61页 |
| 2.2.8 计算DNA及RNA中的腺嘌呤修饰比例 | 第61页 |
| 2.2.9 统计学分析 | 第61页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第61-71页 |
| 2.3.1 LC-ESI-MS/MS分析发现哺乳动物细胞DNA中的m~6dA | 第62-65页 |
| 2.3.2 保留时间确认哺乳动物细胞DNA中的m~6dA | 第65页 |
| 2.3.3 高分辨质谱确认哺乳动物细胞DNA中的m~6dA | 第65-66页 |
| 2.3.4 m~6dA广泛存在于高等真核生物DNA中 | 第66-68页 |
| 2.3.5 糖尿病患者基因组DNA中m~6dA含量降低 | 第68-70页 |
| 2.3.6 降低或过表达FTO改变m~6dA含量 | 第70-71页 |
| 2.4 结论 | 第71页 |
| 参考文献 | 第71-75页 |
| 第三章 RNA中胞嘧啶和腺嘌呤甲基化分析研究 | 第75-132页 |
| 3.1 引言 | 第75页 |
| 3.2 RNA胞嘧啶甲基化及相关修饰分析 | 第75-94页 |
| 3.2.1 前言 | 第75-76页 |
| 3.2.2 实验部分 | 第76-80页 |
| 3.2.2.1 化学试剂 | 第76页 |
| 3.2.2.2 生物样本及RNA提取 | 第76-77页 |
| 3.2.2.3 不同种类RNA的纯化 | 第77页 |
| 3.2.2.4 RNA酶解 | 第77-78页 |
| 3.2.2.5 化学标记 | 第78-79页 |
| 3.2.2.6 LC-ESI-MS/MS分析5-mC,5-hmC,5-foC和5-caC标记产物 | 第79-80页 |
| 3.2.2.7 哺乳动物RNA中4种胞嘧啶修饰的同时分析 | 第80页 |
| 3.2.2.8 统计学分析 | 第80页 |
| 3.2.3 结果与讨论 | 第80-93页 |
| 3.2.3.1 鉴定和定量RNA中4种胞嘧啶修饰的高灵敏方法 | 第80-81页 |
| 3.2.3.2 5-mC,5-hmC,5-foC,5-caC标记产物的鉴定 | 第81-85页 |
| 3.2.3.3 化学标记对色谱分离及质谱检测灵敏度的改善 | 第85-87页 |
| 3.2.3.4 方法学 | 第87-88页 |
| 3.2.3.5 哺乳动物RNA中4种胞嘧啶修饰分析 | 第88-91页 |
| 3.2.3.6 RNA中4种胞嘧啶修饰在人类HCC和CRC组织中的含量变化 | 第91-93页 |
| 3.2.4 小结 | 第93-94页 |
| 3.3 RNA腺嘌呤甲基化修饰分析及其与2型糖尿病的相关性研究 | 第94-109页 |
| 3.3.1 前言 | 第94-95页 |
| 3.3.2 实验部分 | 第95-97页 |
| 3.3.2.1 化学试剂 | 第95页 |
| 3.3.2.2 糖尿病病人样本及临床指标测量 | 第95-96页 |
| 3.3.2.3 糖尿病模型大鼠 | 第96页 |
| 3.3.2.4 血液总RNA提取 | 第96页 |
| 3.3.2.5 总RNA酶解 | 第96页 |
| 3.3.2.6 LC-MS/MS分析RNA中的m~6A含量 | 第96-97页 |
| 3.3.2.7 计算RNA中的m~6A含量 | 第97页 |
| 3.3.2.8 统计学分析 | 第97页 |
| 3.3.3 结果与讨论 | 第97-108页 |
| 3.3.3.1 LC-ESI-MS/MS分析m~6A | 第97-98页 |
| 3.3.3.2 方法学验证 | 第98-100页 |
| 3.3.3.3 外周血RNA样本分析 | 第100-108页 |
| 3.3.4 小结 | 第108-109页 |
| 3.4 循环肿瘤细胞中DNA/RNA甲基化修饰分析 | 第109-125页 |
| 3.4.1 前言 | 第109-110页 |
| 3.4.2 实验部分 | 第110-115页 |
| 3.4.2.1 化学试剂 | 第110页 |
| 3.4.2.2 寡核苷酸链 | 第110-111页 |
| 3.4.2.3 生物样本 | 第111页 |
| 3.4.2.4 样品前处理策略 | 第111-112页 |
| 3.4.2.5 构建CTCs捕获系统 | 第112页 |
| 3.4.2.6 捕获及鉴定人类血液中加入的癌细胞 | 第112页 |
| 3.4.2.7 肺癌病人血液中CTCs捕获 | 第112-113页 |
| 3.4.2.8 LC-ESI-MS/MS分析DNA和RNA修饰 | 第113-114页 |
| 3.4.2.9 DNA和RNA修饰计算公式 | 第114-115页 |
| 3.4.2.10 统计学分析 | 第115页 |
| 3.4.3 结果与讨论 | 第115-125页 |
| 3.4.3.1 样品前处理方法 | 第115-116页 |
| 3.4.3.2 CTCs捕获系统表征 | 第116-117页 |
| 3.4.3.3 anti-EpCAM-Biotin-SA-MBs捕获癌细胞 | 第117页 |
| 3.4.3.4 LC-ESI-MS/MS分析DNA和RNA修饰 | 第117-121页 |
| 3.4.3.5 方法在分析CTCs DNA和RNA修饰中的验证 | 第121页 |
| 3.4.3.6 肺癌病人CTCs中DNA和RNA修饰的变化 | 第121-125页 |
| 3.4.4 小结 | 第125页 |
| 参考文献 | 第125-132页 |
| 第六章 总结与展望 | 第132-134页 |
| 攻读博士期间发表的论文 | 第134-135页 |
| 致谢 | 第135-136页 |
