| 中文摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 缩略语表 | 第6-10页 |
| 第一章 前言 | 第10-25页 |
| 1.1 微生物来源的天然产物 | 第10-13页 |
| 1.1.1 微生物来源的天然产物 | 第10-12页 |
| 1.1.2 放线菌中的天然产物 | 第12-13页 |
| 1.2 微生物天然产物的生物合成 | 第13-19页 |
| 1.2.1 微生物天然产物生物合成 | 第13-14页 |
| 1.2.2 羊毛硫肽生物合成 | 第14-17页 |
| 1.2.3 天然产物的基因组挖掘 | 第17-19页 |
| 1.3 OspF家族概述 | 第19-24页 |
| 1.3.1 MAPK信号通路 | 第19-20页 |
| 1.3.2 Ⅲ型分泌系统 | 第20-21页 |
| 1.3.3 OspF家族 | 第21-23页 |
| 1.3.4 III类羊毛硫肽修饰酶LanKC | 第23-24页 |
| 1.4 论文研究目的及意义 | 第24-25页 |
| 第二章 材料与方法 | 第25-40页 |
| 2.1 实验材料 | 第25-29页 |
| 2.1.1 质粒与菌株 | 第25页 |
| 2.1.2 实验器材 | 第25-26页 |
| 2.1.3 实验试剂 | 第26-27页 |
| 2.1.4 实验相关溶液 | 第27-28页 |
| 2.1.5 细菌培养基 | 第28-29页 |
| 2.2 实验方法 | 第29-40页 |
| 2.2.1 菌株培养及保存 | 第29页 |
| 2.2.2 链霉菌总DNA的提取 | 第29-31页 |
| 2.2.3 目的基因的PCR扩增 | 第31-32页 |
| 2.2.4 DNA琼脂糖凝胶电泳 | 第32页 |
| 2.2.5 PCR产物凝胶回收 | 第32-33页 |
| 2.2.6 载体和DNA片段的双酶切 | 第33页 |
| 2.2.7 载体和DNA片段的酶切连接 | 第33页 |
| 2.2.8 载体与DNA片段的重组连接 | 第33-34页 |
| 2.2.9 感受态细胞的制备及转化 | 第34页 |
| 2.2.10 重组子的验证 | 第34-35页 |
| 2.2.11 目的蛋白的表达 | 第35-36页 |
| 2.2.12 目的蛋白的纯化及脱盐浓缩 | 第36-37页 |
| 2.2.13 蛋白质浓度测定 | 第37页 |
| 2.2.14 SDS-PAGE凝胶电泳 | 第37-38页 |
| 2.2.15 磷酸盐含量的测定 | 第38-40页 |
| 第三章 Ⅲ类羊毛硫肽生物合成基因簇挖掘及其裂解功能域的活性研究 | 第40-56页 |
| 3.1 Ⅲ类羊毛硫肽生物合成基因簇分析 | 第40-44页 |
| 3.1.1 链霉菌Streptomyces coelicolor A3(2)生物合成基因簇分析 | 第40-42页 |
| 3.1.2 Streptomyces coelicolor A3(2)中Ⅲ类羊毛硫肽生物合成基因簇分析 | 第42页 |
| 3.1.3 coeKC二级结构分析 | 第42-43页 |
| 3.1.4 coeKC-lyase与 OspF家族序列对比分析 | 第43-44页 |
| 3.2 丝氨酸裂解酶coeKC-lyase基因的克隆及异源表达 | 第44-48页 |
| 3.2.1 Streptomyces coelicolor A3(2)总DNA提取 | 第44页 |
| 3.2.2 丝氨酸裂解酶coeKC-lyase的基因克隆 | 第44-47页 |
| 3.2.3 丝氨酸裂解酶coeKC-lyase的异源表达 | 第47-48页 |
| 3.3 丝氨酸裂解酶coeKC-lyase的体外反应活性 | 第48-51页 |
| 3.3.1 体外反应体系 | 第48-49页 |
| 3.3.2 LC-MS检测结果 | 第49-50页 |
| 3.3.3 酶活动力学测定 | 第50-51页 |
| 3.4 丝氨酸裂解酶coeKC-lyase的定点突变及异源表达 | 第51-53页 |
| 3.4.1 丝氨酸裂解酶coeKC-lyase的定点突变 | 第51-53页 |
| 3.4.2 点突变丝氨酸裂解酶coeKC-lyase的异源表达 | 第53页 |
| 3.5 点突变丝氨酸裂解酶coeKC-lyase的体外活性 | 第53-56页 |
| 第四章 总结与讨论 | 第56-58页 |
| 参考文献 | 第58-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
