哲罗鲑胰岛素样生长因子Ⅱ原核表达、多克隆抗体的制备及组织表达分析
| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-12页 |
| 引言 | 第12-14页 |
| 第一章 胰岛素样生长因子的研究现状 | 第14-21页 |
| ·IGF的结构 | 第14-15页 |
| ·生长作用 | 第15-16页 |
| ·与受体之间的相互作用 | 第16页 |
| ·与结合蛋白之间的相互作用 | 第16-17页 |
| ·环境对IGF的影响因素 | 第17-19页 |
| ·激素对IGF的影响 | 第17-18页 |
| ·营养状况对IGF的影响 | 第18-19页 |
| ·其他因素对IGF的影响 | 第19页 |
| ·研究的意义与目的 | 第19-21页 |
| 第二章 材料与配方 | 第21-26页 |
| ·实验材料 | 第21-23页 |
| ·实验仪器设备及厂家 | 第21-22页 |
| ·生物材料 | 第22页 |
| ·酶和试剂的来源 | 第22-23页 |
| ·实验配方 | 第23-26页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳相关试剂的配制 | 第23页 |
| ·培养细菌所需相关试剂配制方法 | 第23页 |
| ·SDS-PAGE电泳相关试剂的配制方法 | 第23-24页 |
| ·蛋白纯化相关试剂 | 第24页 |
| ·Elisa实验试剂配制方法 | 第24页 |
| ·感受态DH5α的制备方法 | 第24-26页 |
| 第三章 实验方法 | 第26-41页 |
| ·引物设计 | 第26-27页 |
| ·哲罗鲑IGF-II基因的克隆 | 第27-33页 |
| ·总RNA提取 | 第27-28页 |
| ·哲罗鲑IGF-II基因序列的扩增 | 第28-29页 |
| ·PCR产物的纯化与回收 | 第29页 |
| ·pMD19-T-IGF-II质粒的构建和筛选 | 第29-32页 |
| ·生物信息学分析 | 第32-33页 |
| ·IGF-II基因在哲罗鲑不同组织中的表达 | 第33-34页 |
| ·重组表达载体pSUMO-IGF-II的构建 | 第34-35页 |
| ·重组质粒pSUMO-IGF-II转化到表达菌株 | 第34-35页 |
| ·带有pSUMO-IGF-II质粒的阳性菌的保存 | 第35页 |
| ·IGF-II蛋白的诱导表达及分析 | 第35-37页 |
| ·IGF-II蛋白的诱导表达 | 第35页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE分析 | 第35-37页 |
| ·IGF-II蛋白的纯化 | 第37页 |
| ·IGF-II蛋白的酶切及纯化 | 第37页 |
| ·IGF-II蛋白免疫学鉴定 | 第37-38页 |
| ·IGF-II蛋白生物活性的鉴定 | 第38页 |
| ·鼠抗血清的制备 | 第38-41页 |
| 第四章 结果与分析 | 第41-52页 |
| ·哲罗鲑IGF-II基因的克隆 | 第41-42页 |
| ·哲罗鲑IGF-II的生物信息学分析 | 第42-45页 |
| ·哲罗鲑IGF-II的结构分析 | 第42-43页 |
| ·哲罗鲑IGF-II同源性的分析 | 第43-44页 |
| ·哲罗鲑IGF-II系统进化树分析 | 第44-45页 |
| ·哲罗鲑IGF-II在各组织中的表达分析 | 第45-46页 |
| ·目的基因的获得与表达载体的构建 | 第46-47页 |
| ·IGF-II在大肠杆菌中的诱导表达 | 第47-48页 |
| ·IGF-II蛋白的复性和纯化 | 第48-49页 |
| ·重组IGF-II蛋白的ELISA鉴定 | 第49-50页 |
| ·重组IGF-II蛋白生物学活性的鉴定 | 第50-51页 |
| ·鼠抗哲罗鲑IGF-II抗体效价分析 | 第51-52页 |
| 第五章讨论 | 第52-56页 |
| ·IGF-II基因克隆与结构分析 | 第52-53页 |
| ·IGF-II基因组织表达分析 | 第53页 |
| ·原核表达分析 | 第53-54页 |
| ·表达载体的选择 | 第54页 |
| ·目的蛋白生物活性分析 | 第54页 |
| ·目的蛋白抗体分析 | 第54-56页 |
| 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-65页 |
| 致谢 | 第65-67页 |
| 攻读学位期间发表的论文 | 第67页 |
