| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-14页 |
| 中英文缩略词表 | 第14-15页 |
| 引言 | 第15-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-29页 |
| 综述一 牛病毒性腹泻病毒的研究进展 | 第16-20页 |
| 1 牛病毒性腹泻病毒的概况 | 第16页 |
| 2 牛病毒性腹泻病毒的分类 | 第16-17页 |
| 3 牛病毒性腹泻病毒的基因组 | 第17-18页 |
| 4 牛病毒性腹泻病毒的致病机制 | 第18-20页 |
| 综述二SUMO化修饰在病毒感染中的作用研究进展 | 第20-29页 |
| 1 SUMO分子及其修饰途径 | 第20-22页 |
| ·SUMO分子的发现 | 第20-21页 |
| ·SUMO化修饰的过程 | 第21-22页 |
| ·SUMO化酶 | 第21-22页 |
| ·去SUMO化酶 | 第22页 |
| ·SUMO化修饰的底物特点 | 第22页 |
| 2 SUMO化的底物蛋白 | 第22-24页 |
| ·核蛋白 | 第23页 |
| ·胞浆蛋白和跨膜蛋白 | 第23页 |
| ·病毒蛋白 | 第23-24页 |
| 3 SUMO化修饰与免疫反应 | 第24-25页 |
| ·SUMO化修饰与TLR信号通路 | 第24页 |
| ·SUMO化修饰与TRIM家族蛋白 | 第24-25页 |
| 4 SUMO化修饰对病毒感染的影响 | 第25-29页 |
| ·SUMO化修饰与病毒复制 | 第25-27页 |
| ·SUMO化修饰与病毒组装 | 第27-29页 |
| 第二章 实验研究 | 第29-70页 |
| 实验一 不同生物型BVDV感染对MDBK细胞类泛素基因转录水平的影响 | 第29-42页 |
| 摘要 | 第29-30页 |
| 1 材料与方法 | 第30-34页 |
| ·材料 | 第30页 |
| ·病毒与细胞 | 第30页 |
| ·主要试剂 | 第30页 |
| ·主要仪器 | 第30页 |
| ·方法 | 第30-34页 |
| ·MDBK细胞的培养 | 第30-31页 |
| ·BVDV病毒的增殖 | 第31页 |
| ·BVDV病毒的浓缩 | 第31页 |
| ·BVDV病毒RNA的提取 | 第31-32页 |
| ·反转录病毒总RNA | 第32页 |
| ·BVDV病毒拷贝数的测定 | 第32-33页 |
| ·BVDV NADL病毒TCID50的测定 | 第33页 |
| ·病毒感染MDBK细胞 | 第33页 |
| ·引物设计与合成 | 第33-34页 |
| ·RT-q PCR检测细胞中类泛素基因的m RNA水平 | 第34页 |
| 2 结果 | 第34-40页 |
| ·BVDV病毒拷贝数的测定 | 第34-35页 |
| ·BVDV NADL病毒TCID50的测定 | 第35-36页 |
| ·RT-q PCR检测细胞中类泛素基因m RNA水平 | 第36-40页 |
| 3 讨论 | 第40-42页 |
| 实验二 干扰SUMO1和Ubc9基因对BVDV复制的影响 | 第42-56页 |
| 摘要 | 第42-43页 |
| 1 材料与方法 | 第43-50页 |
| ·材料 | 第43页 |
| ·菌株、病毒、细胞与载体 | 第43页 |
| ·主要试剂 | 第43页 |
| ·主要仪器 | 第43页 |
| ·方法 | 第43-50页 |
| ·si RNA的设计与合成 | 第43-44页 |
| ·单链sh RNA分子合链 | 第44页 |
| ·p LL3.7 质粒的提取 | 第44-45页 |
| ·双酶切p LL3.7 干扰载体 | 第45页 |
| ·回收目的条带 | 第45-46页 |
| ·双链sh RNA分子与p LL3.7 干扰载体连接 | 第46页 |
| ·E.coli DH5α 和BL21感受态细胞的制备 | 第46-47页 |
| ·转化E.coli DH5α 感受态细胞 | 第47页 |
| ·测序鉴定重组p LL3.7 干扰载体 | 第47页 |
| ·无内毒素重组慢病毒质粒的提取 | 第47-48页 |
| ·HEK-293FT细胞的培养 | 第48页 |
| ·HEK-293FT细胞包装重组慢病毒 | 第48-49页 |
| ·慢病毒感染MDBK细胞 | 第49页 |
| ·RT-q PCR筛选有效的sh RNA | 第49页 |
| ·沉默SUMO1和Ubc9基因对BVDV复制的影响 | 第49-50页 |
| 2 结果 | 第50-54页 |
| ·sh RNA-p LL3.7 慢病毒干扰载体的构建 | 第50-51页 |
| ·HEK-293FT细胞包装重组慢病毒 | 第51页 |
| ·RT-q PCR检测sh RNA抑制效果 | 第51-53页 |
| ·沉默SUMO1和Ubc9基因对BVDV复制的影响 | 第53-54页 |
| 3 讨论 | 第54-56页 |
| 实验三 BVDV E0蛋白与细胞类泛素蛋白相互作用的分析 | 第56-70页 |
| 摘要 | 第56-57页 |
| 1 材料与方法 | 第57-64页 |
| ·材料 | 第57页 |
| ·菌株与载体 | 第57页 |
| ·主要试剂 | 第57页 |
| ·主要仪器 | 第57页 |
| ·方法 | 第57-64页 |
| ·引物设计与合成 | 第57-58页 |
| ·PCR扩增目的基因 | 第58页 |
| ·构建重组克隆载体 | 第58-59页 |
| ·菌液PCR鉴定重组克隆载体阳性克隆 | 第59页 |
| ·双酶切鉴定重组克隆载体阳性克隆 | 第59页 |
| ·构建重组表达载体 | 第59-60页 |
| ·菌液PCR和双酶切鉴定重组表达载体阳性克隆 | 第60页 |
| ·重组表达载体的诱导表达 | 第60页 |
| ·SDS-PAGE电泳鉴定融合蛋白表达 | 第60-61页 |
| ·GST-pull down分析蛋白质的相互作用 | 第61-64页 |
| 2 结果 | 第64-68页 |
| ·PCR扩增类泛素基因 | 第64-65页 |
| ·双酶切鉴定p MD18-T-SUMO1/SUMO2/SUMO3/Ubc9重组克隆载体 | 第65页 |
| ·双酶切鉴定p GEX-4T1SUMO1/SUMO2/SUMO3/Ubc9重组表达载体 | 第65-66页 |
| ·IPTG诱导融合蛋白表达 | 第66-67页 |
| ·GST-pull down分析类泛素蛋白与病毒E0蛋白的相互作用 | 第67-68页 |
| 3 讨论 | 第68-70页 |
| 结论 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-81页 |
| 创新点 | 第81-82页 |
| 作者简介 | 第82-83页 |
| 致谢 | 第83-84页 |
| 附件 | 第84页 |
