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BAS1转录因子筛选及SERK4四种剪切方式功能研究

中文摘要第1-5页
Abstract第5-11页
第一部分 前言第11-25页
   ·油菜素内酯第11-12页
   ·油菜素内酯的生物合成途径第12-13页
   ·油菜素内酯的信号转导第13页
   ·油菜素内酯的生物代谢途径第13-15页
     ·BAS1第14页
     ·SOB7第14-15页
     ·UGT73C5和UGT73C6,C-23糖基转移酶第15页
   ·油菜素内酯与其他激素的联系第15-16页
   ·转录调控第16-18页
     ·HD-Zip第16-17页
     ·HAT1,HAT3第17-18页
   ·SERKs第18-22页
     ·BAK1(SERK3),BKK1(SERK4)第21-22页
   ·可变剪切第22-25页
第二部分 实验方法第25-36页
   ·构建pBAS1::GUS拟南芥转基因植株第25-30页
     ·提取拟南芥植株的基因组DNA第25页
     ·克隆目的片段第25页
     ·琼脂糖凝胶电泳及胶回收第25-26页
     ·BP反应第26页
     ·大肠杆菌感受态制备第26-27页
     ·大肠杆菌的转化第27页
     ·菌落PCR鉴定阳性克隆第27页
     ·菌种保存及质粒提取第27页
     ·LR反应第27-28页
     ·LR反应产物转化大肠杆菌第28页
     ·菌落PCR鉴定阳性克隆第28页
     ·菌种保存及质粒提取第28页
     ·农杆菌GV3101热激感受态制备第28页
     ·农杆菌感受态转化第28页
     ·农杆菌菌落PCR鉴定阳性克隆及菌种保存第28-29页
     ·农杆菌介导浸花法转化拟南芥第29页
     ·转基因植株筛选第29-30页
   ·GUS染色第30页
     ·材料培养第30页
     ·染色第30页
   ·转录因子的克隆与转基因植株构建第30-31页
     ·拟南芥RNA提取,反转录为cDNA第30页
     ·转基因植株筛选第30页
     ·拟南芥基因组DNA快速提取第30-31页
     ·PCR鉴定转基因植株第31页
   ·RT-PCR检测BAS1表达量变化第31页
     ·拟南芥RNA提取,反转录为cDNA第31页
     ·RT-PCR第31页
   ·在pBAS1::GUS背景植株中超表达转录因子第31-32页
   ·PCR鉴定SERK4的四种剪切方式第32页
   ·将四种剪切方式分别超表达到Col-0,bri1-5,serk3 serk4背景第32页
     ·四种剪切方式的克隆第32页
   ·转基因植株筛选第32-33页
   ·根长及下胚轴测量第33页
     ·根长测量第33页
     ·下胚轴测量第33页
   ·检测不同条件处理后各种剪切方式的表达量变化第33-34页
     ·不同激素急性处理第33页
     ·不同激素长时间处理第33页
     ·不同温度处理第33页
     ·不同胁迫处理第33页
     ·RT-PCR检测不同剪切方式的表达量第33-34页
   ·不同组织中四种剪切方式表达量差异比较第34-35页
     ·拟南芥不同组织的RNA提取,反转录为cDNA第34-35页
     ·RT-PCR检测不同剪切方式的表达量第35页
   ·serk3 serk4背景下转基因材料的子叶台盼蓝染色第35-36页
第三部分 实验结果与分析第36-51页
   ·转录因子的筛选第36-38页
     ·转录因子预测第36-37页
     ·HAT1OX,HAT3OX植株表型第37-38页
   ·pBAS1::GUS背景植株筛选第38页
   ·GUS染色检测HAT1,HAT3超表达对BAS1表达量的影响第38-40页
   ·SERK4四种不同剪切方式的鉴定第40-42页
   ·不同组织中四种剪切方式表达量比较第42-43页
   ·不同处理后四种剪切方式表达量变化第43-45页
     ·不同激素处理第43-44页
     ·不同温度处理第44-45页
     ·不同胁迫处理第45页
   ·四种剪切方式超表达到Col-0,bri1-5,serk3 serk4中的表型第45-48页
   ·四种剪切方式超表达到bri1-5 背景后的根长和下胚轴比较第48-51页
第四部分 讨论第51-54页
   ·BAS1转录因子筛选第51-52页
     ·HAT1,HAT3超表达下调了BAS1的表达量第51-52页
   ·SERK4四种剪切方式功能的研究第52-54页
     ·Col-0 背景下四种剪切方式的功能研究第52-53页
     ·bri1-5 背景下四种剪切方式的功能研究第53页
     ·serk3 serk4背景下四种剪切方式的功能研究第53-54页
附录第54-61页
 LB培养基配方第54页
 1/2MS培养基配方第54页
 GUS染色液配方第54页
 台盼蓝染色液第54-55页
 抗生素母液浓度第55页
 感受态制备中用到的溶液配方第55-56页
 引物序列第56-59页
 PCR体系及程序第59-61页
参考文献第61-67页
致谢第67页

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