| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-13页 |
| 第一部分 文献综述 | 第13-31页 |
| 1 丝裂原活化蛋白激酶简介 | 第13页 |
| 2 JNK的结构 | 第13-15页 |
| 3 JNK MAPK信号转导的机制 | 第15-19页 |
| ·环境因子激活的JNK信号转导通路 | 第15-16页 |
| ·温度对JNK信号转导通路的影响 | 第15页 |
| ·细菌以及真菌对JNK信号转导通路的影响 | 第15-16页 |
| ·胞内JNK信号转导通路的激活 | 第16-17页 |
| ·支架分子JIPs在JNK MAPK通路中的作用 | 第17-19页 |
| 4 JNK信号转导通路与其他信号转导通路之间的相互作用 | 第19-21页 |
| ·JNK MAPK通路与p38 MAPK通路之间的相互作用 | 第19-20页 |
| ·JNK MAPK信号转导通路与TGF-β/Smad信号转导通路 | 第20-21页 |
| 5 JNK MAPKs的生物学意义 | 第21-23页 |
| ·JNK MAPK的反应底物 | 第21-23页 |
| ·JNK MAPK在昆虫中的作用 | 第23页 |
| 6 本研究问题的提出及研究意义 | 第23-24页 |
| 参考文献 | 第24-31页 |
| 第二部分 实验部分 | 第31-87页 |
| 第一章 荒漠昆虫小胸鳖甲JNK信号通路相关基因的克隆及低温表达分析 | 第31-49页 |
| 1 材料与方法 | 第32-35页 |
| ·供试昆虫及试剂 | 第32页 |
| ·小胸鳖甲总RNA的提取与cDNA的合成 | 第32页 |
| ·小胸鳖甲的低温胁迫处理 | 第32-33页 |
| ·小胸鳖甲JNK的生物信息学分析 | 第33页 |
| ·小胸鳖甲JNK信号转导通路相关基因的筛选 | 第33页 |
| ·实时荧光定量引物设计及PCR标准质粒的构建 | 第33-34页 |
| ·数据分析 | 第34-35页 |
| 2 结果 | 第35-45页 |
| ·小胸鳖甲JNK基因cDNA的序列分析 | 第35-36页 |
| ·小胸鳖甲JNK与其他昆虫JNK的同源性分析 | 第36-37页 |
| ·小胸鳖甲JNK的进化树分析 | 第37-39页 |
| ·小胸鳖甲JNK信号转导通路相关基因标准质粒的构建 | 第39-40页 |
| ·小胸鳖甲JNK信号转导通路相关基因响应低温胁迫的表达模式 | 第40-45页 |
| 3 讨论 | 第45-47页 |
| 参考文献 | 第47-49页 |
| 第二章 小鼠MpJNK抗血清的制备及抗体效价检测 | 第49-61页 |
| 1 材料和方法 | 第49-52页 |
| ·试剂与试虫 | 第49-50页 |
| ·真核表达载体pcDNA3-MpJNK的构建及瞬时表达 | 第50页 |
| ·pET28a-MpJNK重组质粒的构建及原核表达 | 第50-51页 |
| ·MpJNK基因的克隆 | 第50-51页 |
| ·His-MpJNK的诱导表达 | 第51页 |
| ·小鼠MpJNK抗血清的制备及效价测定 | 第51-52页 |
| ·小鼠MpJNK抗体效价的ELISA检测 | 第52页 |
| ·Western blot抗血清检测 | 第52页 |
| ·抗冻功能验证 | 第52页 |
| 2 结果 | 第52-58页 |
| ·真核表达载体pcDNA3-MpJNK的构建及瞬时表达 | 第52-54页 |
| ·pcDNA3.0-MpJNK重组质粒的构建 | 第52-53页 |
| ·重组质粒pcDNA3- MpJNK在小鼠肝脏的瞬时表达检测 | 第53-54页 |
| ·pET28a-MpJNK重组质粒的构建及原核表达 | 第54-55页 |
| ·pET28a-MpJNK重组质粒的构建 | 第54页 |
| ·His-MpJNK融合蛋白的诱导表达与纯化 | 第54-55页 |
| ·MpJNK抗血清的效价及Western blotting检测 | 第55-56页 |
| ·ELISA检测MpJNK抗血清效价 | 第55-56页 |
| ·MpJNK抗血清的Western blotting检测 | 第56页 |
| ·实验菌BL21(pET28a-MpJNK)的抗冻性分析 | 第56-58页 |
| 3 讨论 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-61页 |
| 第三章 小胸鳖甲JNK基因的真核表达及功能研究 | 第61-76页 |
| 1 材料与方法 | 第61-62页 |
| ·实验材料 | 第61-62页 |
| 2 实验方法 | 第62-65页 |
| ·重组质粒pYES2-MpJNK的构建 | 第62页 |
| ·酿酒酵母INVScⅠ感受态的制备、转化及鉴定 | 第62-63页 |
| ·酵母外源蛋白MpJNK的诱导表达 | 第63页 |
| ·半乳糖诱导蛋白表达 | 第63页 |
| ·Western blotting检测酵母外源表达蛋白 | 第63页 |
| ·MpJNK酵母实验菌的抗性功能分析 | 第63-65页 |
| ·酵母实验菌、对照菌生长曲线检测 | 第63页 |
| ·INVSaC1（pYES2-MpJNK）酵母实验菌的抗冻功能验证 | 第63-64页 |
| ·INVSaC1（pYES2-MpJNK）酵母实验菌的胁迫后甘油含量检测 | 第64页 |
| ·INVSaC1（pYES2-MpJNK）酵母实验菌的胁迫后可溶性糖含量检测 | 第64-65页 |
| ·INVSaC1（pYES2-MpJNK）酵母实验菌的胁迫后脯氨酸含量检测 | 第65页 |
| ·数据分析 | 第65页 |
| 3 结果 | 第65-72页 |
| ·构建质粒pYES2-MpJNK | 第65-66页 |
| ·酿酒酵母感受态的制备、转化及鉴定 | 第66页 |
| ·酵母外源蛋白的诱导表达及western-blot检测 | 第66-67页 |
| ·MpJNK酵母实验菌的抗性功能分析 | 第67-70页 |
| ·酵母实验菌、对照菌生长曲线检测 | 第67-68页 |
| ·酵母表达的外源蛋白MpJNK的抗冻性分析 | 第68-70页 |
| ·INVSaC1（pYES2-MpJNK）酵母胁迫后抗逆指标含量的检测 | 第70-72页 |
| ·INVSaC1（pYES2-MpJNK）酵母实验菌的胁迫后的可溶性糖含量检测 | 第70页 |
| ·INVSaC1（pYES2-MpJNK）酵母实验菌胁迫后甘油含量检测 | 第70-71页 |
| ·INVSaC1（pYES2-MpJNK）酵母实验菌的胁迫后的脯氨酸含量检测 | 第71-72页 |
| 4 讨论 | 第72-74页 |
| 参考文献 | 第74-76页 |
| 第四章 酵母转化菌HOG-MAPK信号通路相关基因的低温表达分析 | 第76-87页 |
| 1 材料与方法 | 第77-79页 |
| ·供试菌体及试剂 | 第77页 |
| ·酿酒酵母RNA的提取与cDNA的合成 | 第77页 |
| ·酿酒酵母Hoglp的生物信息学分析 | 第77页 |
| ·酿酒酵母的低温胁迫处理 | 第77-78页 |
| ·实时荧光定量PCR引物的设计 | 第78页 |
| ·实时荧光定量PCR标准质粒的构建 | 第78页 |
| ·数据分析 | 第78-79页 |
| 2 结果 | 第79-83页 |
| ·酿酒酵母Hoglp与小胸鳖甲JNK基因的同源性分析 | 第79页 |
| ·酿酒酵母HOG信号通路相关基因的克隆及标准曲线的制作 | 第79-81页 |
| ·4℃低温胁迫下酵母实验菌HOG-MAPK信号通路相关基因的表达规律 | 第81-82页 |
| ·-18℃处理后酵母实验菌HOG-MAPK信号通路相关基因的表达规律 | 第82-83页 |
| 3 讨论 | 第83-84页 |
| 参考文献 | 第84-87页 |
| 第三部分 结论与展望 | 第87-89页 |
| 1 结论 | 第87页 |
| 2 展望 | 第87-89页 |
| 第四部分 附录 | 第89-93页 |
| 附录一 常用试剂配制方法 | 第89-91页 |
| 附录二 常用仪器设备 | 第91-92页 |
| 附录三 英文缩略语 | 第92-93页 |
| 个人简历 | 第93-94页 |
| 致谢 | 第94-96页 |
