| 摘要 | 第1-10页 |
| 前言 | 第10-11页 |
| 文献综述 | 第11-16页 |
| 1 骨骼肌与糖代谢 | 第11-14页 |
| ·PI3K-AKT通路 | 第11-12页 |
| ·GLUT4 | 第12-13页 |
| ·PPARγ-LXRα通路 | 第13-14页 |
| 2 Musclin基因的研究进展 | 第14-15页 |
| ·Musclin基因的发现和结构 | 第14页 |
| ·Musclin基因的生物学功能 | 第14-15页 |
| 3 肌卫星细胞研究进展 | 第15-16页 |
| 本研究的立项依据和研究意义 | 第16-17页 |
| 试验一 Musclin基因过表达和沉默成肌细胞增殖、葡萄糖摄取、氨基酸分解及其相关基因表达的影响及其作用机制 | 第17-40页 |
| 1 试验材料 | 第17-18页 |
| ·细胞 | 第17页 |
| ·主要试剂 | 第17页 |
| ·主要仪器 | 第17-18页 |
| ·常用试剂配制 | 第18页 |
| 2 试验方法 | 第18-24页 |
| ·小鼠C2C12细胞的传代培养 | 第18页 |
| ·pcDNA3.1(+)-musclin真核表达载体和pcDNA3.1(+)的无内毒素质粒DNA提取 | 第18-19页 |
| ·小鼠C2C12细胞的转染 | 第19-20页 |
| ·细胞RNA提取 | 第20-21页 |
| ·RNA电泳 | 第21页 |
| ·反转录 | 第21页 |
| ·荧光定量PCR | 第21-23页 |
| ·荧光定量PCR的引物 | 第21-22页 |
| ·RT-PCR反应用量及反应条件 | 第22-23页 |
| ·营养指标测定 | 第23-24页 |
| ·培养液中葡萄糖浓度的测定 | 第23页 |
| ·培养液中尿素氮浓度测定 | 第23-24页 |
| 3 结果与分析 | 第24-36页 |
| ·小鼠成肌细胞C2C12瞬时转染试验的效率结果 | 第24-25页 |
| ·不同转染组小鼠成肌细胞RNA提取结果 | 第25页 |
| ·不同处理组中musclin mRNA表达差异 | 第25-27页 |
| ·Musclin基因表达差异对小鼠成肌细胞增殖的影响 | 第27-28页 |
| ·Musclin基因表达差异对营养指标的影响 | 第28-30页 |
| ·Musclin基因过表达和沉默对培养液中葡萄糖含量的影响 | 第28-29页 |
| ·Musclin基因过表达和沉默对培养液中尿素氮含量的影响 | 第29-30页 |
| ·Musclin基因过表达和沉默对各相关基因表达的影响 | 第30-36页 |
| ·不同转染组AKT1 mRNA表达的差异 | 第30-31页 |
| ·不同转染组AKT2 mRNA表达的差异 | 第31-32页 |
| ·不同转染组PI3K p110 mRNA表达的差异 | 第32-33页 |
| ·不同转染组PPARγ mRNA表达的差异 | 第33-34页 |
| ·不同转染组LXRα mRNA表达的差异 | 第34-35页 |
| ·不同转染组GLUT4 mRNA表达的差异 | 第35-36页 |
| 4 讨论 | 第36-40页 |
| ·关于实时荧光定量PCR | 第36页 |
| ·Musclin基因的过表达和沉默效果 | 第36-37页 |
| ·Musclin基因过表达和沉默对细胞增殖的作用 | 第37-38页 |
| ·Musclin基因过表达和沉默对葡萄糖和尿素氮的影响 | 第38-39页 |
| ·Musclin基因过表达和沉默对相关基因表达的影响 | 第39-40页 |
| 试验二 绵羊骨骼肌肌卫星细胞的分离与鉴定 | 第40-49页 |
| 1 试验材料 | 第40页 |
| ·动物组织 | 第40页 |
| ·细胞试验相关试剂和分子生化试剂 | 第40页 |
| ·试验仪器 | 第40页 |
| ·常用试剂的配制与缓冲液 | 第40页 |
| 2 试验方法 | 第40-45页 |
| ·绵羊骨骼肌肌卫星细胞的原代培养与纯化 | 第40-41页 |
| ·绵羊骨骼肌肌卫星细胞的传代培养 | 第41页 |
| ·绵羊肌卫星细胞的冻存和复苏 | 第41-42页 |
| ·绵羊肌卫星细胞的鉴定 | 第42-45页 |
| ·Myostatin基因的扩增 | 第42-44页 |
| ·细胞RNA的提取 | 第42-43页 |
| ·RNA电泳 | 第43页 |
| ·反转录 | 第43页 |
| ·RT-PCR扩增绵羊Myostatin基因 | 第43-44页 |
| ·Desmin细胞免疫化学 | 第44-45页 |
| ·绵羊肌卫星细胞的分化 | 第45页 |
| 3 结果与分析 | 第45-48页 |
| ·RNA提取结果 | 第45-46页 |
| ·绵羊Myostatin基因PCR扩增 | 第46-47页 |
| ·Desmin细胞免疫化学 | 第47页 |
| ·绵羊肌卫星细胞细胞分化结果 | 第47-48页 |
| 4 讨论 | 第48-49页 |
| ·绵羊肌卫星细胞内Myostatin基因的PCR扩增 | 第48页 |
| ·关于免疫细胞化学 | 第48-49页 |
| ·有关细胞分化 | 第49页 |
| 全文结论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-54页 |
| Abstract | 第54-58页 |
| 致谢 | 第58页 |
