| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-11页 |
| 第一章 PRRSV的研究进展 | 第11-25页 |
| 前言 | 第11页 |
| ·PRRSV的病原学 | 第11-14页 |
| ·PRRSV的命名 | 第11-12页 |
| ·PRRSV的分类地位与分型 | 第12页 |
| ·PRRSV的形态学特性 | 第12-13页 |
| ·PRRSV的理化特性 | 第13页 |
| ·PRRSV的生物学特性 | 第13-14页 |
| ·PRRSV的基因组结构与基因表达 | 第14-16页 |
| ·基因组结构 | 第14-15页 |
| ·基因表达 | 第15-16页 |
| ·基因组的变异 | 第16页 |
| ·PRRSV的抗原蛋白 | 第16-18页 |
| ·核衣壳蛋白(N蛋白) | 第16-17页 |
| ·基质蛋白(M蛋白) | 第17页 |
| ·囊膜蛋白(E蛋白) | 第17-18页 |
| ·糖蛋白GP2、GP3、GP4 | 第18页 |
| ·PRRSV的致病机理及流行病学特点 | 第18-19页 |
| ·PRRS的诊断方法 | 第19-22页 |
| ·PRRSV的分离鉴定 | 第19页 |
| ·病毒抗原检测方法 | 第19-21页 |
| ·病毒的核酸检测 | 第19-20页 |
| ·胶体金免疫检测技术(GIA) | 第20-21页 |
| ·病毒抗体检测 | 第21-22页 |
| ·免疫过氧化物酶单层试验(IPMA) | 第21页 |
| ·间接免疫荧光试验(IFA) | 第21页 |
| ·间接酶联免疫吸附试验(间接ELISA) | 第21-22页 |
| ·血清中和试验(SN) | 第22页 |
| ·PRRSV的单克隆抗体研究 | 第22-23页 |
| ·论文主要研究内容及目的意义 | 第23-25页 |
| 第二章 PRRS病毒N蛋白的单克隆抗体制备与鉴定 | 第25-54页 |
| ·实验材料 | 第25-29页 |
| ·细胞、质粒、菌种和实验动物 | 第25页 |
| ·病毒毒株 | 第25页 |
| ·主要仪器 | 第25页 |
| ·主要试剂药品与耗材 | 第25-26页 |
| ·主要试剂配制 | 第26-29页 |
| ·实验方法 | 第29-42页 |
| ·PRRSV标准毒株的增殖 | 第29-30页 |
| ·Trizol法提取病毒RNA | 第30页 |
| ·病毒的纯化 | 第30页 |
| ·重组核衣壳N蛋白的制备 | 第30-35页 |
| ·PRRSV ORF7基因片段的克隆、鉴定和测序 | 第30-31页 |
| ·目的片段的获得 | 第30-31页 |
| ·重组质粒pMD-18T-N的构建 | 第31页 |
| ·原核表达重组质粒pET-28a(+)-N的构建 | 第31页 |
| ·阳性重组质粒pET-28a(+)-N的原核表达 | 第31-32页 |
| ·重组N蛋白的纯化 | 第32-34页 |
| ·Ni-NTA树脂的处理 | 第33页 |
| ·表达菌株裂解物的制备 | 第33页 |
| ·重组N蛋白的纯化 | 第33-34页 |
| ·重组N蛋白的透析、复性及浓缩 | 第34页 |
| ·重组N蛋白浓度测定 | 第34-35页 |
| ·重组N蛋白免疫学活性鉴定 | 第35页 |
| ·电转移 | 第35页 |
| ·Western-blotting反应 | 第35页 |
| ·重组蛋白的动物免疫 | 第35页 |
| ·间接ELISA反应条件的确定 | 第35-37页 |
| ·细胞融合 | 第37-39页 |
| ·骨髓瘤细胞的准备 | 第37页 |
| ·饲养细胞的准备 | 第37-38页 |
| ·脾细胞的准备 | 第38页 |
| ·细胞融合过程 | 第38-39页 |
| ·阳性杂交瘤细胞株的筛选 | 第39页 |
| ·阳性杂交瘤细胞的亚克隆和扩大培养 | 第39页 |
| ·杂交瘤细胞的冻存、复苏和检测 | 第39-40页 |
| ·杂交瘤细胞的冻存 | 第39-40页 |
| ·杂交瘤细胞的复苏和检测 | 第40页 |
| ·单克隆抗体腹水制备 | 第40页 |
| ·单克隆抗体特异性鉴定 | 第40-41页 |
| ·间接ELISA法 | 第40页 |
| ·Western-blotting反应 | 第40-41页 |
| ·杂交瘤细胞上清及腹水效价测定 | 第41页 |
| ·单抗亚类鉴定 | 第41页 |
| ·单抗腹水中IgG抗体的提取 | 第41-42页 |
| ·腹水中IgG抗体的粗提 | 第41-42页 |
| ·腹水中IgG抗体的进一步纯化 | 第42页 |
| ·实验结果 | 第42-50页 |
| ·病毒增殖 | 第42页 |
| ·PRRSV ORF7基因片段扩增 | 第42-43页 |
| ·重组质粒pMD-18T-N的酶切鉴定和序列分析 | 第43-44页 |
| ·原核表达重组质粒pET-28a(+)-N的鉴定 | 第44-45页 |
| ·重组质粒pET-28a(+)-N的表达及纯化 | 第45页 |
| ·重组蛋白免疫原性分析(Western-blotting试验) | 第45-46页 |
| ·间接ELISA检测动物免疫抗体效价 | 第46页 |
| ·间接ELISA法筛选单抗反应条件的确定 | 第46-48页 |
| ·阳性杂交瘤细胞株的筛选 | 第48页 |
| ·单克隆抗体特异性鉴定 | 第48-50页 |
| ·间接ELISA法鉴定 | 第48页 |
| ·Western-blotting反应鉴定 | 第48-50页 |
| ·单抗细胞上清及腹水效价测定 | 第50页 |
| ·单克隆抗体亚类鉴定 | 第50页 |
| ·单抗腹水纯化结果 | 第50页 |
| ·实验讨论 | 第50-54页 |
| ·病毒RNA提取 | 第50-51页 |
| ·免疫原的选择 | 第51页 |
| ·表达系统的选择 | 第51-52页 |
| ·单克隆抗体的制备 | 第52-53页 |
| ·细胞培养中的污染和救治 | 第53-54页 |
| 第三章 结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-60页 |
| 致谢 | 第60页 |