| 中文摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 中英文名词对照 | 第10-12页 |
| 前言 | 第12-15页 |
| 第一部分 实时定量PCR检测血中白念珠菌(C.al)DNA的方法学及临床标本验证 | 第15-62页 |
| 一、实验材料 | 第16-19页 |
| (一) 主要仪器 | 第16页 |
| (二) 试剂及耗材 | 第16-18页 |
| (三) 菌种来源 | 第18页 |
| (四) 标本采集 | 第18-19页 |
| 二、实验方法 | 第19-40页 |
| (一) 特异性引物及TaqMan探针设计 | 第19页 |
| (二) 培养基的制备 | 第19-20页 |
| (三) 基因组DNA提取 | 第20-22页 |
| (四) 引物有效性及特异性验证 | 第22-23页 |
| (五) 探针有效性及特异性验证 | 第23-24页 |
| (六) 标准品质粒的制备 | 第24-30页 |
| (七) 实时定量PCR引物和探针浓度优化 | 第30-35页 |
| (八) 实时定量PCR反应体系建立及实验流程 | 第35-37页 |
| (九) 检测限、灵敏度和特异度测试 | 第37-38页 |
| (十) 标准曲线建立 | 第38页 |
| (十一) 仪器准确性及重复性测试 | 第38页 |
| (十二) 模拟血标本中白念珠菌DNA提取效率测定 | 第38页 |
| (十三) 模拟标本存放稳定性监测 | 第38页 |
| (十四) RQ-PCR对临床标本白念珠菌的检测 | 第38-39页 |
| (十五) 统计学处理 | 第39-40页 |
| 三、实验结果 | 第40-57页 |
| (一) 特异性引物及TaqMan探针序列 | 第40页 |
| (二) 引物和探针特异性验证 | 第40-41页 |
| (三) 菌落PCR | 第41-42页 |
| (四) 测序 | 第42-44页 |
| (五) 比对 | 第44-45页 |
| (六) 质粒电泳 | 第45-46页 |
| (七) 质粒PCR | 第46-47页 |
| (八) 质粒DNA拷贝数的换算 | 第47页 |
| (九) 实时定量PCR引物和探针浓度优化 | 第47-50页 |
| (十) 检测限、灵敏度和特异度测定 | 第50-51页 |
| (十一) 标准曲线线性范围 | 第51-52页 |
| (十二) 仪器的准确性及重复性 | 第52-53页 |
| (十三) 血标本中白念珠菌DNA提取效率 | 第53页 |
| (十四) 储存标本的稳定性 | 第53-54页 |
| (十五) 临床标本检测结果 | 第54-57页 |
| 四、讨论 | 第57-62页 |
| 第二部分 实时定量PCR检测外科发热患者血中白念珠菌并与血培养结果的对照研究 | 第62-72页 |
| 一、实验材料 | 第63-65页 |
| (一) 主要仪器 | 第63页 |
| (二) 试剂及耗材 | 第63-64页 |
| (三) 标本采集 | 第64-65页 |
| 二、实验方法 | 第65-66页 |
| (一) 患者血标本培养 | 第65页 |
| (二) 临床血标本白念珠菌基因组DNA提取 | 第65页 |
| (三) 检测限和灵敏度、特异度的确定 | 第65页 |
| (四) 健康成年人全血基因组的检测 | 第65页 |
| (五) 临床标本检测 | 第65页 |
| (六) 统计学处理 | 第65-66页 |
| 三、实验结果 | 第66-69页 |
| (一) 健康成年人血标本检测结果 | 第66页 |
| (二) 发热外科患者血标本实时定量PCR检测结果 | 第66-68页 |
| (三) 外科发热患者血培养结果 | 第68-69页 |
| 四、讨论 | 第69-72页 |
| 第三部分 实时定量PCR检测白念珠菌在YPD培养基和血中对抗生素的敏感性 | 第72-86页 |
| 一、实验材料 | 第74-76页 |
| (一) 主要仪器 | 第74页 |
| (二) 试剂及耗材 | 第74-75页 |
| (三) 菌种来源 | 第75-76页 |
| 二、实验方法 | 第76-79页 |
| (一) YPD液体培养基配制 | 第76页 |
| (二) 抗生素的稀释 | 第76页 |
| (三) YPD液体培养基中药物敏感性试验 | 第76-77页 |
| (四) 健康人全血中药物敏感性试验 | 第77页 |
| (五) 基因组DNA的提取 | 第77页 |
| (六) 引物和探针、标准品 | 第77-78页 |
| (七) 实时定量PCR反应体系 | 第78-79页 |
| 三、实验结果 | 第79-83页 |
| (一) YPD液体培养基中白念珠菌抗生素药物敏感性试验 | 第79-81页 |
| (二) 健康人全血中白念珠菌抗生素药物敏感性试验 | 第81-83页 |
| 四、讨论 | 第83-86页 |
| 文献综述 | 第86-94页 |
| 参考文献 | 第94-100页 |
| 致谢 | 第100-101页 |
| 个人简历 | 第101-102页 |
