| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-10页 |
| 第1章 引言 | 第10-17页 |
| ·RIP的概念 | 第10-11页 |
| ·RIP的分布 | 第11-12页 |
| ·RIP的酶学机制 | 第12-14页 |
| ·RNA N-糖苷酶 | 第13页 |
| ·RNA水解酶活性 | 第13页 |
| ·超螺旋环状DNA的酶活性 | 第13页 |
| ·RIP的超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性 | 第13-14页 |
| ·其他酶活性 | 第14页 |
| ·核糖体失活蛋白的生理功能和应用 | 第14-15页 |
| ·抗病毒应用 | 第14页 |
| ·抗真菌和昆虫 | 第14页 |
| ·调节细胞代谢 | 第14-15页 |
| ·储藏蛋白作用 | 第15页 |
| ·RIP的应用 | 第15页 |
| ·总结和展望 | 第15-16页 |
| ·本实验的目的和意义 | 第16-17页 |
| 第2章 转基因烟草中CsRIPI基因的拷贝数分析 | 第17-26页 |
| ·材料与仪器 | 第18-19页 |
| ·试验材料 | 第18页 |
| ·生化试剂与仪器 | 第18页 |
| ·培养基和溶液 | 第18-19页 |
| ·试验方法 | 第19-21页 |
| ·T_1代阳性转基因烟草植株筛选 | 第19-20页 |
| ·DNA的提取与定量 | 第20页 |
| ·引物设计 | 第20页 |
| ·实时荧光定量PCR反应体系与程序 | 第20页 |
| ·pBI121-CsRIPI和axil1基因扩增效率检测 | 第20-21页 |
| ·实时荧光定量PCR法检测CsRIPI基因的拷贝数 | 第21页 |
| ·实验结果 | 第21-25页 |
| ·T_1代阳性转基因烟草植株初步筛选结果 | 第21-22页 |
| ·标准曲线的制作 | 第22页 |
| ·熔解曲线分析 | 第22-24页 |
| ·CsMPI基因拷贝数的计算 | 第24-25页 |
| ·讨论与分析 | 第25-26页 |
| 第3章 CsRIPI基因抗烟草花叶病毒的功能研究 | 第26-31页 |
| ·试验材料 | 第26-27页 |
| ·试验方法 | 第27-28页 |
| ·T_0代CsRIPI基因烟草转基因植株的选取 | 第27页 |
| ·T_1代CsRIPI基因烟草转基因植株的培养 | 第27页 |
| ·汁液摩擦法接种TMV | 第27页 |
| ·接种植株培养及数据采集 | 第27-28页 |
| ·结果与分析 | 第28-30页 |
| ·T_1代转基因烟草PCR鉴定 | 第28页 |
| ·转基因烟草对TMV的抗性分析 | 第28-30页 |
| ·讨论和分析 | 第30-31页 |
| 第4章 CsRIPIA链基因编码蛋白的纯化 | 第31-40页 |
| ·材料与仪器 | 第31-33页 |
| ·菌株和载体 | 第31页 |
| ·主要试剂与仪器 | 第31-32页 |
| ·培养基和溶液 | 第32-33页 |
| ·试验方法 | 第33-37页 |
| ·CsRIPIA链基因DNA片段的克隆 | 第33页 |
| ·CsMPIA链基因和pCzn1载体的双酶切 | 第33-34页 |
| ·连接 | 第34页 |
| ·大肠杆菌转化 | 第34页 |
| ·阳性克隆的PCR鉴定 | 第34页 |
| ·pCzn1-CsMPI载体转化至Arctic Express~(TM)原核宿主菌 | 第34页 |
| ·IPTG诱导pCzn1-CsRIPI载体融合蛋白的表达分析 | 第34-35页 |
| ·CsRIPI A链基因融合蛋白的Ni柱亲和纯化 | 第35页 |
| ·SDS-PAGE电泳鉴定 | 第35-36页 |
| ·动物免疫 | 第36-37页 |
| ·实验结果 | 第37-39页 |
| ·pCzn1-CsRIPI载体目的基因序列检测 | 第37页 |
| ·蛋白的表达分析 | 第37-38页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第38-39页 |
| ·讨论与分析 | 第39-40页 |
| 第5章 结论与展望 | 第40-42页 |
| ·结论 | 第40页 |
| ·展望 | 第40-42页 |
| 致谢 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-48页 |
