| 摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-13页 |
| 缩略词表 | 第13-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-26页 |
| 1 PYY功能以及研究进展 | 第14-16页 |
| ·多肽家族中的PYY | 第14-15页 |
| ·PYY基因定位 | 第15页 |
| ·PYY在机体内的功能 | 第15-16页 |
| ·PYY偏爱的受体 | 第16页 |
| 2 SNP概述 | 第16-18页 |
| ·SNP的分类 | 第16-17页 |
| ·SNP的检测方法 | 第17-18页 |
| 3 MIRNA的功能和研究进展 | 第18-22页 |
| ·miRNA的研究方法 | 第19-20页 |
| ·miRNA的生物合成过程 | 第20-21页 |
| ·miRNA的作用机制 | 第21-22页 |
| 4 DNA甲基化功能与机制研究进展 | 第22-24页 |
| ·DNA甲基化的生物学功能 | 第22-23页 |
| ·DNA甲基化检测方法 | 第23页 |
| ·甲基转移模式 | 第23-24页 |
| 5 本试验的目的和意义 | 第24-26页 |
| 第二章 材料与方法 | 第26-49页 |
| 1 试验材料 | 第26-33页 |
| ·细胞样品 | 第26页 |
| ·组织样本 | 第26页 |
| ·提取全基因组DNA样品 | 第26页 |
| ·提取总RNA组织样 | 第26页 |
| ·载体和菌株 | 第26-27页 |
| ·主要仪器与设备 | 第27-28页 |
| ·主要的试剂与药品 | 第28-30页 |
| ·主要试剂的配置 | 第30-32页 |
| ·主要的分子生物学软件和网站 | 第32-33页 |
| 2 试验方法 | 第33-49页 |
| ·血液、组织DNA提取 | 第33-34页 |
| ·组织、细胞总RNA提取 | 第34-36页 |
| ·cDNA的制备 | 第36-37页 |
| ·PYY基因表达谱分析 | 第37页 |
| ·序列扩增寻找SNP | 第37-40页 |
| ·引物设计 | 第37-38页 |
| ·PCR扩增体系、条件 | 第38页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳、胶回收 | 第38-39页 |
| ·连接 | 第39页 |
| ·连接产物的转化 | 第39页 |
| ·阳性克隆的筛选及测序 | 第39页 |
| ·测序结果分析和对比 | 第39-40页 |
| ·猪PYY基因3’UTR序列的克隆和重组表达质粒构建 | 第40-43页 |
| ·引物设计 | 第40页 |
| ·双酶切 | 第40页 |
| ·连接 | 第40-41页 |
| ·重组质粒的原核表达鉴定 | 第41页 |
| ·质粒的抽提及酶切鉴定 | 第41-42页 |
| ·细胞培养 | 第42页 |
| ·瞬时转染 | 第42-43页 |
| ·荧光素酶相对活性测定与分析 | 第43页 |
| ·构建突变型载体 | 第43-45页 |
| ·引物设计 | 第43-44页 |
| ·PCR扩增 | 第44-45页 |
| ·Western Blot验证 | 第45-46页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第45页 |
| ·SDS-PAGE凝胶电泳 | 第45-46页 |
| ·免疫反应 | 第46页 |
| ·ECL化学发光检测 | 第46页 |
| ·DNA甲基化 | 第46-49页 |
| ·CpG岛预测 | 第46-47页 |
| ·甲基化分析模板DNA的处理 | 第47页 |
| ·PCR扩增及克隆、测序 | 第47-49页 |
| 第三章 结果与分析 | 第49-64页 |
| 1 猪PYY基因组织表达谱分析 | 第49-52页 |
| ·总RNA的提取和质量控制 | 第49页 |
| ·cDNA的合成和质量检测 | 第49-50页 |
| ·梅山、大白猪PYY组织表达谱 | 第50-51页 |
| ·猪PYY基因在梅山猪30日龄、75日龄和275日龄十二指肠和胃中的表达分析 | 第51页 |
| ·猪PYY基因在大白猪3日龄、30日龄和120日龄十二指肠和胃中的表达分析 | 第51-52页 |
| 2 大白和梅山猪PYY基因3’UTR扩增和SNP寻找 | 第52-53页 |
| ·猪PYY基因3’UTR序列的克隆 | 第52-53页 |
| ·大白和梅山猪PYY基因3’UTR序列对比 | 第53页 |
| 3 MIR-652对靶基因调控研究 | 第53-60页 |
| ·与靶基因绑定的microRNA预测 | 第53-54页 |
| ·猪PYY基因3’UTR序列的克隆及酶切回收 | 第54页 |
| ·荧光素酶报告载体的构建以及检测结果 | 第54-56页 |
| ·野生型荧光素酶报告载体的构建 | 第54-55页 |
| ·miR-652 mimic转染PK细胞活性分析 | 第55-56页 |
| ·突变型荧光素酶报告载体构建以及检测结果 | 第56-58页 |
| ·突变载体构建 | 第56-57页 |
| ·双荧光素酶报告基因检测结果 | 第57-58页 |
| ·转染后PK细胞中PYY基因定量分析 | 第58页 |
| ·Westernblot检测PYY蛋白水平的表达 | 第58-60页 |
| 4 猪PYY基因5’侧翼序列甲基化的研究 | 第60-64页 |
| ·猪PYY基因5’侧翼序列CpG岛预测 | 第60页 |
| ·含有CpG岛片段的扩增 | 第60-61页 |
| ·PYY基因5’侧翼CpG岛甲基化分析 | 第61-64页 |
| 第四章 讨论 | 第64-69页 |
| ·猪PYY基因组织表达谱分析 | 第64-65页 |
| ·猪PYY基因3’UTR中的SNP | 第65-66页 |
| ·MIR-652对PYY基因的调控 | 第66-67页 |
| ·猪PYY基因5’侧翼甲基化分析 | 第67-69页 |
| 第五章 小结 | 第69-71页 |
| ·本试验主要结论 | 第69页 |
| ·本研究的特色与创新点 | 第69-70页 |
| ·本研究的不足以及下一步的工作建议 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-78页 |
| 致谢 | 第78页 |
