苏云金芽孢杆菌介导的小菜蛾精氨酸激酶基因的RNA干扰
| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 1 前言 | 第10-16页 |
| ·苏云金芽孢杆菌及其改造进展 | 第10-12页 |
| ·精氨酸激酶及其在昆虫中的研究概况 | 第12-14页 |
| ·生物介导的RNAi | 第14-15页 |
| ·本研究的立题依据和意义 | 第15-16页 |
| 2 材料与方法 | 第16-31页 |
| ·实验材料 | 第16-18页 |
| ·生物材料 | 第16页 |
| ·酶、试剂与试剂盒 | 第16-18页 |
| ·主要仪器与软件 | 第18页 |
| ·实验方法 | 第18-31页 |
| ·PxAK氨基酸序列比对及进化树的构建 | 第18-19页 |
| ·引物设计 | 第19-20页 |
| ·构建RNAi元件的引物 | 第19页 |
| ·RNAi表达载体改造的引物 | 第19-20页 |
| ·检测工程菌的引物 | 第20页 |
| ·荧光定量PCR的引物 | 第20页 |
| ·基因片段的胶回收 | 第20页 |
| ·细菌质粒DNA的提取 | 第20-21页 |
| ·RNAi元件中目的基因与启动子序列的扩增 | 第21-22页 |
| ·小菜蛾总RNA的提取 | 第21页 |
| ·小菜蛾cDNA的获得 | 第21页 |
| ·目的基因AKi的扩增 | 第21-22页 |
| ·RNAi元件中启动子序列的扩增 | 第22页 |
| ·RNAi表达载体的构建与改造 | 第22-27页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第22-23页 |
| ·热激法介导质粒转化大肠杆菌 | 第23页 |
| ·RNAi表达载体的构建 | 第23-26页 |
| ·RNAi表达载体的改造 | 第26-27页 |
| ·Bt工程菌的构建 | 第27-29页 |
| ·Bt感受态细胞的制备 | 第27-28页 |
| ·用于Bt工程菌构建的质粒的制备 | 第28页 |
| ·电穿孔法介导质粒转化Bt | 第28页 |
| ·Bt工程菌的鉴定 | 第28-29页 |
| ·Bt工程菌生理检测 | 第29-30页 |
| ·Bt工程菌生长曲线的测定 | 第29页 |
| ·Bt工程菌RNAi表达载体质粒稳定性的检测 | 第29页 |
| ·Bt工程菌芽孢的数量的检测 | 第29页 |
| ·Bt工程菌dsRNA的检测 | 第29-30页 |
| ·Bt工程菌喂饲实验的RNAi效应分析 | 第30-31页 |
| ·RNAi效应对小菜蛾生长发育的影响 | 第30页 |
| ·RNAi效应的RT-PCR分析 | 第30-31页 |
| 3 结果与分析 | 第31-49页 |
| ·PxAK的同源性与进化地位 | 第31-38页 |
| ·小菜蛾总RNA的质量 | 第38页 |
| ·构建RNAi元件的AKi与启动子序列 | 第38-39页 |
| ·RNAi表达载体的构建 | 第39-41页 |
| ·RNAi载体的改造 | 第41-42页 |
| ·Bt工程菌的转化 | 第42-44页 |
| ·Bt工程菌的伴胞晶体特征 | 第44页 |
| ·工程菌8010-AKi的生理特征 | 第44-47页 |
| ·生长特征 | 第44-45页 |
| ·外源质粒的稳定性 | 第45-46页 |
| ·芽孢形成特征 | 第46页 |
| ·dsRNA的表达情况 | 第46-47页 |
| ·工程菌致死效率及对基因的干扰效应的分析 | 第47-49页 |
| ·工程菌的致死效率 | 第47-48页 |
| ·工程菌对基因表达的抑制 | 第48-49页 |
| 4 结论与讨论 | 第49-53页 |
| 参考文献 | 第53-61页 |
| 附录 | 第61-66页 |
| 附录1 主要仪器与软件 | 第61-62页 |
| 附录2 毒理过程记录的虫体死亡形态 | 第62-65页 |
| 附录3 PxAK基因的全长cDNA序列 | 第65-66页 |
| 致谢 | 第66页 |
