| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-14页 |
| 第一部分 两种骨肉瘤转基因小鼠模型的构建 | 第14-58页 |
| 一、引言 | 第14-25页 |
| 1. 骨肉瘤简介 | 第14-15页 |
| 2. 骨肉瘤的研究现状 | 第15-21页 |
| ·骨肉瘤的细胞起源 | 第16-18页 |
| ·骨肉瘤与相关基因的研究 | 第18-21页 |
| 3. 骨肉瘤模型的研究进展 | 第21-23页 |
| 4. KiSS-1和GPR54在肿瘤中的研究 | 第23-25页 |
| 二、材料和方法 | 第25-36页 |
| 1. 材料与试剂 | 第25-26页 |
| 2. 仪器 | 第26-27页 |
| 3. 实验方法 | 第27-36页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备 | 第27页 |
| ·转化 | 第27-28页 |
| ·质粒的抽提(小量) | 第28-29页 |
| ·酶切 | 第29-30页 |
| ·连接 | 第30页 |
| ·PCR和电泳 | 第30-31页 |
| ·PCR产物的纯化 | 第31-32页 |
| ·DNA凝胶的纯化 | 第32页 |
| ·质粒测序 | 第32-33页 |
| ·引物设计 | 第33页 |
| ·序列分析 | 第33页 |
| ·显微注射 | 第33页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第33-34页 |
| ·细胞总RNA的提取和反转录 | 第34-36页 |
| 三、结果与分析 | 第36-54页 |
| 1. 含有Co/1 3.6-TAg的pEGFP-c2临时载体的构建 | 第36-41页 |
| ·原始RCAS-TAg质粒上T/t antigen的测序结果 | 第36-39页 |
| ·SV40 TAg片段的克隆 | 第39页 |
| ·Col1-promoter 3.6K的酶切和回收 | 第39-40页 |
| ·Col1 3.6-TAg载体的酶切鉴定 | 第40-41页 |
| ·Col1 3.6-TAg载体测序的比对结果 | 第41页 |
| 2. 含有Og2-TAg的pEGFP-c2临时载体的构建 | 第41-43页 |
| ·原质粒Og2-promoter的测序结果 | 第41-42页 |
| ·Og2-promoter的获得 | 第42页 |
| ·临时载体Og2-TAg的酶切鉴定结果 | 第42-43页 |
| ·Og2-TAg载体测序的比对结果 | 第43页 |
| 3. 显微注射前片段纯度电泳验证 | 第43-45页 |
| ·Col1 3.6-TAg片段的纯度验证 | 第43-44页 |
| ·Og2-TAg片段的验证 | 第44-45页 |
| 4. 第一次显微注射F_0代小鼠的基因型鉴定 | 第45页 |
| 5. 第一次显微注射F_0小鼠骨肉瘤发病情况的观察 | 第45-49页 |
| 6. Col1 3.6-TAg第二次显微注射基因型鉴定结果 | 第49-51页 |
| 7. KiSS-1和GPR54在骨肉瘤细胞系中的表达情况 | 第51-52页 |
| 8. LGR4及相关蛋白在骨肉瘤中的生物信息学分析结果 | 第52-54页 |
| 四、总结与讨论 | 第54-58页 |
| 1. 骨肉瘤研究的挑战 | 第54页 |
| 2. 模型构建中启动子的选择 | 第54-55页 |
| 3. KiSS-1和LGR4在骨肉瘤中的作用 | 第55-56页 |
| 4. 在动物模型内研究骨肉瘤的优势 | 第56页 |
| 5. 本研究中的难点与不足 | 第56-58页 |
| 第二部分 GPR116促进乳腺癌转移的分子机制 | 第58-85页 |
| 一、引言 | 第58-62页 |
| 二、材料与方法 | 第62-69页 |
| 1. 实验材料 | 第62页 |
| 2. 实验方法 | 第62-69页 |
| 三、实验结果与分析 | 第69-83页 |
| 1. GPR116在体内抑制乳腺癌细胞的转移 | 第69-74页 |
| ·在乳腺癌细胞中干扰GPR116表达抑制其在小鼠体内的肺部转移 | 第69-71页 |
| ·干扰乳腺癌细胞GPR116表达抑制其在小鼠体内的骨转移及骨损伤 | 第71-74页 |
| 2. GPR116调控乳腺癌微环境的信号通路研究 | 第74-83页 |
| ·GPR116在人乳腺癌细胞中抑制MMP8的表达 | 第74-76页 |
| ·GPR116通过RhoA来抑制MMP8的表达 | 第76-77页 |
| ·持续激活的RhoA回复GPR116缺失引起的MMP8表达上调 | 第77-78页 |
| ·沉默GPR116后IL-8的表达上调 | 第78-79页 |
| ·MMP8直接促进IL-8的表达 | 第79-80页 |
| ·沉默GPR116后促进中性粒细胞的迁移及对乳腺癌细胞的杀伤 | 第80-82页 |
| ·沉默GPR116后下调了TGF-β信号通路的活性 | 第82-83页 |
| 四、总结与讨论 | 第83-85页 |
| 参考文献 | 第85-94页 |
| 附录 | 第94-98页 |
| 致谢 | 第98页 |
