| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 第一章 前言 | 第9-16页 |
| 1 棘皮动物免疫相关基因研究进展 | 第9页 |
| 2 细胞凋亡机制 | 第9-10页 |
| 3 caspase 家族概述 | 第10-15页 |
| ·caspase 家族的定义及分类 | 第11-12页 |
| ·caspase 家族成员参与的重要细胞信号通路 | 第12-15页 |
| ·死亡受体通路 | 第13页 |
| ·线粒体通路 | 第13-14页 |
| ·内质网通路 | 第14-15页 |
| ·各通路间的相互联系 | 第15页 |
| 4 本研究的目的与意义 | 第15-16页 |
| 第二章 仿刺参 Ajcasp1 基因的克隆及生物信息学分析 | 第16-29页 |
| 1 材料和方法 | 第16-21页 |
| ·材料 | 第16-17页 |
| ·实验动物 | 第16页 |
| ·菌株和质粒 | 第16页 |
| ·主要试剂与配制 | 第16-17页 |
| ·引物设计与合成 | 第17页 |
| ·方法 | 第17-21页 |
| ·总 RNA 的提取 | 第17-18页 |
| ·cDNA 的合成 | 第18页 |
| ·PCR 扩增 ORF 框 | 第18-19页 |
| ·PCR 产物特异性条带的回收与纯化 | 第19页 |
| ·目的基因片段与 PMD-18T 载体连接 | 第19-20页 |
| ·转化 | 第20页 |
| ·PCR 鉴定阳性克隆 | 第20页 |
| ·数据分析处理 | 第20-21页 |
| 2 结果 | 第21-27页 |
| ·仿刺参总 RNA 的提取及检测 | 第21页 |
| ·仿刺参 Ajcasp1 的全长 cDNA 序列克隆 | 第21-22页 |
| ·仿刺参基因的生物信息学分析 | 第22-27页 |
| ·Ajcasp1 及其编码氨基酸的序列结构分析 | 第22-23页 |
| ·AjCASP1 蛋白的二级及三级结构预测 | 第23-24页 |
| ·AjCASP1 序列的同源性比较和进化树分析 | 第24-27页 |
| 3 讨论 | 第27-29页 |
| 第三章 仿刺参 AjCASP1 重组蛋白表达及抗体制备 | 第29-39页 |
| 1 材料和方法 | 第29-35页 |
| ·材料 | 第29-30页 |
| ·实验动物 | 第29页 |
| ·菌株和质粒 | 第29页 |
| ·主要试剂与配制 | 第29-30页 |
| ·引物设计与合成 | 第30页 |
| ·方法 | 第30-35页 |
| ·cDNA 的合成 | 第30-31页 |
| ·目的基因的克隆 | 第31页 |
| ·质粒提取 | 第31-32页 |
| ·表达载体的构建 | 第32-33页 |
| ·重组蛋白的表达与鉴定 | 第33页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第33-34页 |
| ·多克隆抗体的制备 | 第34页 |
| ·血清效价的测定 | 第34-35页 |
| ·Western blot 分析 | 第35页 |
| 2 结果 | 第35-37页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第35-36页 |
| ·重组蛋白的表达纯化及 Western blot 分析 | 第36-37页 |
| ·多抗的制备及检测 | 第37页 |
| 3 讨论 | 第37-39页 |
| 第四章 仿刺参 AjCASP1 蛋白的功能研究 | 第39-44页 |
| 1 材料与方法 | 第39-41页 |
| ·材料 | 第39-40页 |
| ·实验动物 | 第39页 |
| ·主要试剂与配制 | 第39页 |
| ·引物设计与合成 | 第39-40页 |
| ·方法 | 第40-41页 |
| ·Western blot 检测组织分布 | 第40页 |
| ·LPS 诱导后仿刺参 caspase 基因的表达水平 | 第40-41页 |
| 2 结果 | 第41-42页 |
| ·Western blot 检测各组织中蛋白浓度 | 第41页 |
| ·LPS 刺激后 Ajcasp1 mRNA 表达变化 | 第41-42页 |
| 3 讨论 | 第42-44页 |
| 结论 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-49页 |
