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鸭圆环病毒ORF2和ORF3基因部分生物学特性的研究

符号说明第1-8页
中文摘要第8-10页
ABSTRACT第10-12页
1前言第12-33页
   ·鸡传染性贫血病毒(Chicken Infection Anaemia Virus,CAV)第12-17页
     ·CAV病原学特征第13页
     ·分子生物学特征第13-14页
     ·流行病学第14页
     ·临床症状与病理变化第14-15页
     ·诊断方法第15-17页
     ·CAV的预防和防制第17页
   ·猪圆环病毒(Porcine Circovirus,PCV)第17-22页
     ·病原学特征第18页
     ·PCV的分子生物学特征第18-19页
     ·PCV的发病机制第19页
     ·流行病学第19-20页
     ·PCV诊断方法第20-21页
     ·PCV的防制第21-22页
   ·鹦鹉喙羽病毒病(Psittacine Beak and Feather Disease Virus,PBFDV)第22-24页
     ·病原学特征第22页
     ·分子生物学特征第22-23页
     ·PBFDV组织病理学第23页
     ·诊断与防治第23-24页
   ·鸭圆环病毒(Duck Circovirus,DuCV)第24-27页
     ·鸭圆环病毒的病原学第24页
     ·鸭圆环病毒的基因组第24-26页
     ·鸭圆环病毒的流行病学第26页
     ·鸭圆环病毒的诊断第26-27页
   ·细胞凋亡的研究第27-31页
     ·细胞凋亡特征第27-28页
     ·细胞凋亡过程以及机制第28-29页
     ·细胞凋亡的调节第29-30页
     ·细胞凋亡检测方法第30页
     ·细胞凋亡的意义第30-31页
   ·圆环病毒属病毒蛋白核定位功能及其DNA绑定功能等的研究第31-32页
   ·本研究的目的意义第32-33页
2 材料与方法第33-59页
   ·DuCV鸭圆环病毒ORF3为病毒功能阅读框的验证第33-44页
     ·材料第33-35页
     ·方法第35-44页
   ·鸭圆环病毒Cap核定位功能的研究第44-50页
     ·材料第44-46页
     ·方法第46-50页
   ·Cap蛋白的自我装配及其DNA绑定区域的确定第50-59页
     ·材料第50-52页
     ·各Cap蛋白的设计第52-54页
     ·各重组蛋白的纯化第54-55页
     ·含双拷贝DuCV基因组的质粒的构建第55-58页
     ·电镜第58页
     ·DNA银定的验证第58-59页
3 结果与分析第59-75页
   ·ORF3作为DuCV功能性基因的验证及ORF3蛋白凋亡活性的研究第59-65页
     ·DuCV Cap基因的PCR扩增结果第59页
     ·pF-ORF3供体质粒的筛选和酶切鉴定第59-60页
     ·重组杆状病毒载体(rBacmid-ORF3)的鉴定第60页
     ·rBacmid-ORF3表达产物的Western-blotting检测第60页
     ·rBacmid-ORF3表达产物的IFA检测第60-61页
     ·ORF3为功能阅读框的Western Blot验证第61页
     ·ORF3为功能阅读框的IFA验证第61-62页
     ·试验组与对照组病毒增长曲线图第62-63页
     ·流式细胞技术检测结果第63-65页
   ·鸭圆环病毒Cap核定位功能的研究第65-71页
     ·EGFP基因的PCR扩增结果第65页
     ·pF-EGFP供体质粒的筛选和酶切鉴定第65-66页
     ·两个截短了的Cap基因的扩增结果第66页
     ·供体质粒的筛选和酶切鉴定第66-67页
     ·重组杆状病毒载体(rBacmid-ORF3)的鉴定第67页
     ·各Cap-EGFP蛋白表达产物的Western-blotting检测第67-68页
     ·Cap蛋白亚细胞定位结果第68页
     ·各敲除蛋白在细胞中的亚定位第68-69页
     ·细胞分裂期中EGFP-CP和EGFP在细胞中的亚定位第69-71页
   ·Cap蛋白的自我装配及其DNA绑定区域的确定第71-75页
     ·各Cap基因的扩增结果第71页
     ·供体质粒的筛选和酶切鉴定第71-72页
     ·重组杆状病毒载体的鉴定第72页
     ·各Cap-EGFP蛋白表达产物的Western-blotting检测第72-73页
     ·表达产物的IFA检测第73页
     ·EMSA实验结果第73-74页
     ·纯化的Cap蛋白电镜观察第74-75页
4 讨论第75-80页
   ·DuCV ORF3蛋白生物学活性的研究第75页
   ·DuCV Cap蛋白核定位信号、DNA绑定功能的确定及其自我装配成VLP的研究第75-80页
5 结论第80-81页
6 参考文献第81-90页
7 致谢第90-91页
8 攻读学位期间发表论文情况第91页

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