| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-28页 |
| ·新城疫概况 | 第15-23页 |
| ·新城疫 | 第15页 |
| ·新城疫病毒的形态和基因组结构 | 第15-19页 |
| ·新城疫病毒的复制策略 | 第19-21页 |
| ·新城疫病毒的生物学特性 | 第21-22页 |
| ·新城疫病毒 NDV4 疫苗株概况 | 第22-23页 |
| ·反向遗传操作系统 | 第23-26页 |
| ·新城疫病毒的反向遗传操作系统 | 第23-25页 |
| ·新城疫病毒反向遗传操作系统的基础应用研究 | 第25-26页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第26-28页 |
| 第二章 NDV4-C 耐热无毒株反向遗传操作系统的建立 | 第28-41页 |
| ·材料和方法 | 第28-35页 |
| ·病毒和细胞 | 第28页 |
| ·质粒、菌株和合成基因 | 第28页 |
| ·SPF 鸡胚和 SPF 鸡 | 第28页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第28-29页 |
| ·引物设计与合成 | 第29页 |
| ·病毒的纯化 | 第29页 |
| ·病毒 RNA 的提取、反转录和 RT-PCR | 第29-30页 |
| ·PCR 产物的测序 | 第30-31页 |
| ·辅助质粒和微基因组质粒的构建 | 第31-32页 |
| ·以 pOLTV5 为载体的全长 cDNA 克隆的构建 | 第32页 |
| ·以 pCI-neo 为载体的全长 cDNA 克隆的构建 | 第32-33页 |
| ·微基因组系统的功能验证 | 第33页 |
| ·病毒的拯救 | 第33页 |
| ·间接免疫荧光检测拯救病毒 | 第33-34页 |
| ·拯救病毒的序列鉴定和酶切鉴定 | 第34页 |
| ·拯救病毒的特性及致病性实验 | 第34页 |
| ·拯救病毒的生长动力学曲线 | 第34页 |
| ·拯救病毒的耐热性测定 | 第34-35页 |
| ·结果 | 第35-39页 |
| ·NDV4-C 全长基因组序列的测序和扩增 | 第35页 |
| ·NDV4-C 基因组全长 cDNA 克隆和辅助质粒的构建 | 第35-36页 |
| ·微基因组系统的功能验证 | 第36页 |
| ·拯救病毒的鉴定 | 第36-37页 |
| ·间接免疫荧光鉴定 | 第37-38页 |
| ·拯救病毒的致病性测定 | 第38页 |
| ·拯救病毒的生长动力学曲线 | 第38-39页 |
| ·拯救病毒的耐热性测定 | 第39页 |
| ·核酸序列号 | 第39页 |
| ·讨论 | 第39-41页 |
| 第三章 表达绿色荧光蛋白重组 NDV 的构建和生物学特性研究 | 第41-46页 |
| ·材料和方法 | 第41-43页 |
| ·病毒、质粒和细胞 | 第41页 |
| ·SPF 鸡胚 | 第41页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第41页 |
| ·引物设计与合成 | 第41页 |
| ·含有 eGFP 基因重组 NDV4-C 病毒全长 cDNA 克隆的构建 | 第41页 |
| ·重组病毒 rNDV4-eGFP 的拯救 | 第41-42页 |
| ·rNDV4-eGFP 的序列鉴定 | 第42页 |
| ·rNDV4-eGFP 感染细胞的荧光鉴定 | 第42页 |
| ·拯救病毒表达外源基因稳定性的测定 | 第42页 |
| ·拯救病毒的生长动力学曲线 | 第42-43页 |
| ·结果 | 第43-45页 |
| ·含有 eGFP 基因的重组 NDV4-C 基因组全长 cDNA 克隆的构建 | 第43页 |
| ·重组病毒的拯救 | 第43页 |
| ·重组病毒表达外源基因稳定性的鉴定 | 第43页 |
| ·重组病毒在鸡胚上的生长特性 | 第43-45页 |
| ·讨论 | 第45-46页 |
| 第四章 聚合酶蛋白对 NDV4-C 耐热性的作用研究 | 第46-53页 |
| ·材料和方法 | 第46-49页 |
| ·病毒、质粒和细胞 | 第46页 |
| ·SPF 鸡胚 | 第46页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第46页 |
| ·引物设计与合成 | 第46页 |
| ·嵌合病毒全长基因组 cDNA 克隆的构建 | 第46-47页 |
| ·突变病毒和嵌合病毒的拯救 | 第47-48页 |
| ·拯救病毒毒力的测定 | 第48页 |
| ·病毒生长动力学曲线的测定 | 第48页 |
| ·病毒耐热性的测定 | 第48页 |
| ·病毒微基因组质粒的构建 | 第48页 |
| ·聚合酶蛋白活性的测定 | 第48-49页 |
| ·结果 | 第49-51页 |
| ·重组嵌合病毒基因组全长 cDNA 克隆的构建 | 第49页 |
| ·亲本病毒和重组病毒的拯救 | 第49页 |
| ·拯救病毒的毒力 | 第49页 |
| ·拯救病毒的生长动力学 | 第49-50页 |
| ·拯救病毒的耐热性测定 | 第50页 |
| ·表达荧光素酶的微基因组质粒构建 | 第50页 |
| ·聚合酶活性测定 | 第50-51页 |
| ·讨论 | 第51-53页 |
| 第五章 rNDV4-LL01(F/HN) 耐热嵌合病毒株的构建和免疫评价 | 第53-64页 |
| ·材料和方法 | 第53-57页 |
| ·病毒、质粒和细胞 | 第53页 |
| ·SPF 鸡胚和 SPF 鸡 | 第53页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第53页 |
| ·引物设计与合成 | 第53页 |
| ·嵌合病毒全长基因组 cDNA 克隆的构建 | 第53-55页 |
| ·突变病毒和嵌合病毒的拯救 | 第55页 |
| ·嵌合病毒毒力的测定 | 第55页 |
| ·病毒生长动力学曲线的测定 | 第55页 |
| ·病毒耐热性的测定 | 第55页 |
| ·免疫攻毒试验 | 第55页 |
| ·HI 抗体和 IgG 抗体的检测 | 第55-56页 |
| ·间接 ELISA 测定 IgA 抗体水平 | 第56页 |
| ·SPF 鸡的排毒情况 | 第56-57页 |
| ·数据处理和分析 | 第57页 |
| ·结果 | 第57-62页 |
| ·突变病毒和嵌合病毒的拯救和鉴定 | 第57页 |
| ·突变病毒和嵌合病毒的毒力测定 | 第57页 |
| ·突变病毒和嵌合病毒在 SPF 鸡胚上的生长特性 | 第57-58页 |
| ·突变病毒和嵌合病毒的耐热性 | 第58页 |
| ·交叉血凝抑制试验 (cross-HI)测定免疫组的 HI 滴度 | 第58-59页 |
| ·免疫组 IgG 抗体水平的测定 | 第59页 |
| ·免疫组 IgA 抗体水平的测定 | 第59-60页 |
| ·不同免疫组的免疫保护力和排毒情况 | 第60页 |
| ·rNDV4-MuF/HNLL01 免疫组排毒量较 rNDV4-C 免疫组显著降低 | 第60-62页 |
| ·讨论 | 第62-64页 |
| 第六章 全文结论 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-76页 |
| 附录 | 第76-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
| 作者简历 | 第81页 |
