| 摘要 | 第1-12页 |
| ABSTRACT | 第12-16页 |
| 中英文缩写对照表 | 第16-17页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-34页 |
| 1 引言 | 第17页 |
| 2 脂肪形成概述 | 第17-19页 |
| 3 WNT信号通路调控脂肪形成的研究进展 | 第19-22页 |
| ·WNT信号通路及信号转导 | 第19-20页 |
| ·WNT信号通路调控脂肪形成 | 第20-22页 |
| 4 miRNA调控脂肪细胞分化的研究进展 | 第22-31页 |
| ·miRNA的发现、生物合成及作用机制 | 第22-24页 |
| ·miRNA参与调控脂肪细胞的分化过程 | 第24-31页 |
| 5 miRNA调控WNT信号通路影响脂肪形成的研究进展 | 第31-32页 |
| 6 miRNA的转录调控 | 第32-33页 |
| 7 目的与意义 | 第33-34页 |
| 第二章 猪背部皮下脂肪组织小RNA文库的构建及Solexa测序 | 第34-73页 |
| 前言 | 第34页 |
| 1 材料与方法 | 第34-39页 |
| ·试验动物以及样品采集 | 第34-35页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第35页 |
| ·组织总RNA的提取 | 第35-36页 |
| ·小RNA文库的构建、Solexa高通量测序及数据分析 | 第36-39页 |
| ·试验流程 | 第36-37页 |
| ·信息分析流程 | 第37页 |
| ·初级生物信息学分析 | 第37页 |
| ·高级生物信息学分析 | 第37-39页 |
| 2 结果与分析 | 第39-70页 |
| ·总RNA样品的质量检测结果 | 第39-40页 |
| ·Solexa高通量测序结果的生物信息学分析 | 第40-70页 |
| ·大白猪和梅山猪小RNA库的测序结果数据统计 | 第40-45页 |
| ·小RNA的分类注释 | 第45-48页 |
| ·已知miRNAs的表达量分析 | 第48-55页 |
| ·miRNA“种子”序列的碱基编辑 | 第55-59页 |
| ·猪新的候选miRNA的鉴定分析和mirna基因的聚类分析 | 第59-70页 |
| 3 讨论 | 第70-72页 |
| 4 小结 | 第72-73页 |
| 第三章 猪背部皮下脂肪组织miRNA的表达分析及功能预测 | 第73-85页 |
| 前言 | 第73页 |
| 1 材料与方法 | 第73-78页 |
| ·试验动物以及样品采集 | 第73页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第73-74页 |
| ·引物的设计与合成 | 第74-76页 |
| ·组织总RNA的提取 | 第76页 |
| ·RNA的反转录 | 第76-77页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第76-77页 |
| ·普通PCR反应 | 第77页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳和成像 | 第77页 |
| ·Stem-loop QPCR验证 | 第77-78页 |
| ·统计学分析 | 第78页 |
| ·miRNA的靶基因预测及功能分析 | 第78页 |
| 2 结果与分析 | 第78-82页 |
| ·普通PCR和stem-loop QPCR验证结果 | 第78-80页 |
| ·miRNA的靶基因预测及功能分析 | 第80-82页 |
| 3 讨论 | 第82-84页 |
| 4 小结 | 第84-85页 |
| 第四章 miR-135a和miR-183对3T3-L1前脂肪细胞分化及脂肪形成的影响 | 第85-106页 |
| 前言 | 第85页 |
| 1 材料与方法 | 第85-92页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第85页 |
| ·主要溶液的配制 | 第85-86页 |
| ·miR-135a和miR-183寡核苷酸的转染及3T3-L1前脂肪细胞的诱导分化 | 第86-87页 |
| ·细胞总RNA的提取 | 第87页 |
| ·QPCR分析 | 第87-89页 |
| ·油红O染色及吸光度值分析 | 第89页 |
| ·甘油三酯含量测定 | 第89页 |
| ·预测靶基因3'UTR载体及其突变载体的构建 | 第89-92页 |
| ·靶基因的鉴定 | 第92页 |
| ·经典WNT信号通路相关基因及蛋白质的检测 | 第92页 |
| ·Western blotting分析 | 第92页 |
| ·统计学分析 | 第92页 |
| 2 结果与分析 | 第92-103页 |
| ·miR-135a对3T3-L1前脂肪细胞分化及脂肪形成的影响 | 第92-97页 |
| ·miR-135a在3T3-L1前脂肪细胞分化过程中下调表达 | 第92-93页 |
| ·超表达miR-135a抑制3T3-L1前脂肪细胞的分化 | 第93-95页 |
| ·miR-135a靶基因的鉴定及其潜在调控机制 | 第95-97页 |
| ·miR-183对3T3-L1前脂肪细胞分化及脂肪形成的影响 | 第97-103页 |
| ·miR-183促进3T3-L1前脂肪细胞的分化 | 第97-101页 |
| ·miR-183靶基因的鉴定及其潜在调控机制 | 第101-103页 |
| 3 讨论 | 第103-105页 |
| 4 小结 | 第105-106页 |
| 第五章 小鼠mir-183启动子的转录活性研究 | 第106-122页 |
| 前言 | 第106页 |
| 1 材料与方法 | 第106-110页 |
| ·主要试剂及仪器 | 第106-109页 |
| ·生物信息学分析 | 第109页 |
| ·启动子片段的扩增及载体构建 | 第109页 |
| ·细胞转染 | 第109页 |
| ·细胞总RNA的提取、反转录、QPCR及Western blotting分析 | 第109页 |
| ·ChIP-PCR验证转录因子GATA3与mir-183启动子的结合 | 第109页 |
| ·统计学分析 | 第109-110页 |
| 2 结果与分析 | 第110-119页 |
| ·mmu-mir-183转录规律的预测 | 第110-112页 |
| ·mmu-mir-183启动子区域载体构建及荧光活性分析 | 第112-114页 |
| ·mmu-mir-183 promoter 2缺失片段载体构建及荧光活性分析 | 第114-115页 |
| ·mmu-mir-183核心启动子转录因子的结合预测及其试验验证 | 第115-118页 |
| ·转录因子GATA3对成熟miR-183表达量的影响及其机制研究 | 第118-119页 |
| 3 讨论 | 第119-121页 |
| 4 小结 | 第121-122页 |
| 主要创新点 | 第122页 |
| 进一步的研究内容 | 第122-123页 |
| 参考文献 | 第123-138页 |
| 在读期间发表论文题录 | 第138-139页 |
| 致谢 | 第139页 |
