| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-10页 |
| 引言 | 第10-12页 |
| 1 文献综述 | 第12-23页 |
| ·双孢蘑菇概述 | 第12-16页 |
| ·双孢蘑菇的食用、药用价值 | 第12-13页 |
| ·双孢蘑菇的人工栽培历史 | 第13页 |
| ·双孢蘑菇褐变的相关研究 | 第13-15页 |
| ·酶促褐变 | 第14-15页 |
| ·病原性促褐变 | 第15页 |
| ·双孢蘑菇褐变的抑制研究 | 第15-16页 |
| ·多酚氧化酶概述 | 第16-21页 |
| ·多酚氧化酶的分子特征和分布情况 | 第16页 |
| ·多酚氧化酶的作用机制 | 第16-17页 |
| ·多酚氧化酶在分子水平上的研究 | 第17页 |
| ·PPO 基因的克隆 | 第17页 |
| ·PPO 基因的家族性 | 第17页 |
| ·PPO 保守区结构 | 第17页 |
| ·植物中的多酚氧化酶 | 第17-18页 |
| ·双孢蘑菇多酚氧化酶的研究进展 | 第18-20页 |
| ·双孢蘑菇多酚氧化酶的酶学特性 | 第18-20页 |
| ·双孢蘑菇多酚氧化酶分子生物学研究进展 | 第20页 |
| ·多酚氧化酶在生物技术方面的应用和展望 | 第20-21页 |
| ·研究目的与意义 | 第21-23页 |
| 2 双孢蘑菇 PPO 基因家族的鉴定 | 第23-27页 |
| ·材料与方法 | 第23页 |
| ·数据库的搜索 | 第23页 |
| ·序列比对及系统发育分析 | 第23页 |
| ·结果与分析 | 第23-24页 |
| ·双孢蘑菇 PPO 家族成员的鉴定 | 第23页 |
| ·双孢蘑菇 PPO 基因家族系统发育树分析 | 第23-24页 |
| ·小结 | 第24-27页 |
| 3 PPO 基因的表达分析 | 第27-33页 |
| ·试验材料 | 第27-29页 |
| ·菌株材料 | 第27-28页 |
| ·试验试剂 | 第28页 |
| ·试验仪器 | 第28页 |
| ·试验所用引物 | 第28-29页 |
| ·方法 | 第29-31页 |
| ·双孢蘑菇总 RNA 的提取纯化 | 第29-30页 |
| ·2 cDNA 第一链反转录反应及半定量 RT-PCR 分析 | 第30-31页 |
| ·反转录反应 | 第30页 |
| ·半定量 RT-PCR 分析 | 第30-31页 |
| ·结果与分析 | 第31-32页 |
| ·PPO 基因在子实体不同发育时期的表达情况 | 第31页 |
| ·PPO 基因在 15℃不同储藏时间的表达情况 | 第31-32页 |
| ·小结 | 第32-33页 |
| 4 褐变相关 PPO 基因的功能分析 | 第33-48页 |
| ·试验材料 | 第33-34页 |
| ·菌株材料 | 第33页 |
| ·试验试剂 | 第33页 |
| ·试验仪器 | 第33-34页 |
| ·培养基 | 第34页 |
| ·方法 | 第34-40页 |
| ·双孢蘑菇高效转化体系的构建 | 第34-38页 |
| ·表达载体 pCghG1 的构建 | 第34-37页 |
| ·农杆菌 pCghG1 介导的双孢蘑菇子实体遗传转化 | 第37-38页 |
| ·GUS 组织化学染色 | 第38页 |
| ·PPO3 启动子的转化和表达分析 | 第38-40页 |
| ·表达载体 pCghP3 的构建 | 第38-39页 |
| ·农杆菌 pCghP3 介导的双孢蘑菇的遗传转化 | 第39页 |
| ·PCR 检测抗性菌丝 | 第39-40页 |
| ·GUS 组织染色法检测抗性菌丝 | 第40页 |
| ·出菇 | 第40页 |
| ·结果与分析 | 第40-46页 |
| ·双孢蘑菇高效转化体系的构建 | 第40-45页 |
| ·表达载体 pCghG1 的构建 | 第40-44页 |
| ·农杆菌 pCghG1 介导的双孢蘑菇子实体遗传转化 | 第44页 |
| ·GUS 组织化学染色检测 | 第44-45页 |
| ·表达载体 pCghP3 的转化和表达 | 第45-46页 |
| ·PCR 检测抗性菌丝 | 第45-46页 |
| ·GUS 组织化学染色法检测抗性菌丝 | 第46页 |
| ·小结 | 第46-48页 |
| 5 讨论 | 第48-50页 |
| ·PPO 与双孢蘑菇的褐变密切相关 | 第48页 |
| ·PPO 基因的表达在双孢蘑菇褐变中具有重要的作用 | 第48-49页 |
| ·双孢蘑菇高效转化体系的建立 | 第49页 |
| ·PPO3 启动子为诱导性启动子 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-56页 |
| 附录 | 第56-57页 |
| 个人简介 | 第57-58页 |
| 致谢 | 第58页 |
