| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-8页 |
| 文献综述 | 第8-19页 |
| 1 引言 | 第19-21页 |
| ·纳豆激酶的研究现状 | 第19-20页 |
| ·研究的目的与意义 | 第20页 |
| ·研究内容与方案 | 第20-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-33页 |
| ·实验材料 | 第21-23页 |
| ·菌种和质粒 | 第21页 |
| ·主要仪器与设备 | 第21页 |
| ·培养基和溶液 | 第21-23页 |
| ·主要酶与试剂 | 第23页 |
| ·aprN基因在大肠杆菌中的表达 | 第23-29页 |
| ·原始菌株BN-1 16S rDNA序列的测定 | 第23页 |
| ·引物设计与合成 | 第23页 |
| ·纳豆枯草芽胞杆菌BN-1全基因组DNA的提取 | 第23-24页 |
| ·目的基因的扩增 | 第24-25页 |
| ·PCR产物的回收 | 第25页 |
| ·E.coli DH10B感受态细胞的制备 | 第25-26页 |
| ·pET28a转化至E. coli DH10B | 第26页 |
| ·pET28a质粒的提取 | 第26页 |
| ·pET28a与PCR产物的双酶切 | 第26-27页 |
| ·酶切胶回收与连接反应 | 第27-28页 |
| ·纳豆激酶的诱导表达 | 第28页 |
| ·纳豆激酶诱导表达产物的SDS-PAGE鉴定 | 第28页 |
| ·酶活测定方法 | 第28页 |
| ·纳豆激酶诱导表达的条件优化 | 第28-29页 |
| ·重组菌生长曲线的测定 | 第29页 |
| ·aprN基因在粟酒裂殖酵母中的表达 | 第29-33页 |
| ·真核表达目的基因的扩增 | 第29页 |
| ·重组质粒pESP-2-aprN的构建 | 第29-30页 |
| ·重组质粒pESP-2-aprN的筛选与双酶切验证 | 第30页 |
| ·重组质粒pESP2-aprN转化至S.pombe yAS56 | 第30-31页 |
| ·表达菌株的转化及表达与否的检验 | 第31页 |
| ·转化子的菌落PCR验证 | 第31页 |
| ·蛋白质的表达 | 第31页 |
| ·蛋白质表达的检测 | 第31-32页 |
| ·表达产物纤溶活性的测定 | 第32-33页 |
| 3 结果与分析 | 第33-41页 |
| ·原始菌株BN-1 16S rDNA序列结果的比对 | 第33页 |
| ·目的基因的克隆及原核表达载体pET28a-aprN的构建 | 第33-34页 |
| ·重组质粒pET28a-aprN的验证 | 第34页 |
| ·纳豆激酶在大肠杆菌中的表达 | 第34-36页 |
| ·重组菌诱导条件的优化 | 第36-37页 |
| ·重组菌生长曲线的测定 | 第37页 |
| ·真核表达目的基因的获得 | 第37-38页 |
| ·重组质粒pESP2-aprN的验证 | 第38-39页 |
| ·转化子的菌落PCR验证 | 第39页 |
| ·蛋白表达的初步检验 | 第39-40页 |
| ·蛋白表达的SDS-PAGE鉴定 | 第40-41页 |
| 4 讨论 | 第41-43页 |
| 5 结论 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-49页 |
| 致谢 | 第49-50页 |
| 作者简介 | 第50页 |
