| 致谢 | 第1-7页 |
| 前言 | 第7-11页 |
| 中文摘要 | 第11-16页 |
| Abstract | 第16-21页 |
| 论文创新点 | 第21-22页 |
| 缩略词表 | 第22-28页 |
| 1. 黄酮类化合物库内小分子4a促ES细胞神经分化研究 | 第28-45页 |
| 引言 | 第28-29页 |
| ·仪器与材料 | 第29-31页 |
| ·仪器 | 第29-30页 |
| ·主要试剂及配制 | 第30页 |
| ·实验动物和细胞系 | 第30-31页 |
| ·实验方法 | 第31-35页 |
| ·小鼠ES细胞常规培养 | 第31-32页 |
| ·小鼠ES细胞体外定向分化为神经细胞培养 | 第32-33页 |
| 1-2.3 形态学观察 | 第33页 |
| ·拟胚体冰冻切片 | 第33页 |
| ·免疫细胞化学法 | 第33页 |
| ·Western blot法 | 第33-34页 |
| ·FM1-43FX染色 | 第34页 |
| ·数据分析 | 第34-35页 |
| ·实验结果 | 第35-43页 |
| ·化合物4a诱导小鼠ES细胞分化为神经细胞流程 | 第35-36页 |
| ·化合物4a具有促小鼠ES细胞体外神经分化作用 | 第36-37页 |
| ·化合物4a浓度依赖性促小鼠ES细胞神经分化 | 第37-38页 |
| ·分化过程中化合物4a诱导神经特异性蛋白表达的时效变化 | 第38-39页 |
| ·化合物4a促ES细胞衍生神经元突触囊泡摄取功能改变 | 第39-40页 |
| ·分化过程中化合物4a促MAPK家族蛋白表达时效变化 | 第40-41页 |
| ·MEK抑制剂U0126对化合物4a促神经元分化效应的抑制作用 | 第41-43页 |
| ·讨论 | 第43-44页 |
| ·小结 | 第44-45页 |
| 2. 化合物4a调控线粒体能量代谢与促ES细胞神经分化相关性 | 第45-58页 |
| 引言 | 第45-46页 |
| ·仪器与材料 | 第46-47页 |
| ·仪器 | 第46页 |
| ·主要试剂及配制 | 第46页 |
| ·实验动物和细胞系 | 第46-47页 |
| ·实验方法 | 第47-51页 |
| ·小鼠ES细胞常规培养 | 第47-48页 |
| ·小鼠ES细胞体外定向分化为神经细胞培养 | 第48-49页 |
| ·形态学观察 | 第49页 |
| ·活细胞线粒体示踪 | 第49页 |
| ·免疫细胞化学法 | 第49页 |
| ·细胞内cAMP、cGMP含量检测 | 第49页 |
| ·JC-1染色检测线粒体膜电位水平 | 第49-50页 |
| ·葡萄糖、乳酸、乳酸脱氢酶活力和ATP含量等能量代谢指标检测 | 第50页 |
| ·海马生物能量分析仪检测氧气消耗率和胞外酸化率 | 第50页 |
| ·细胞活力检测 | 第50页 |
| ·线粒体Ca~(2+)浓度测定 | 第50-51页 |
| ·透射电镜生物样品制备 | 第51页 |
| ·数据分析 | 第51页 |
| ·实验结果 | 第51-56页 |
| ·化合物4a促小鼠ES细胞神经分化伴随线粒体分布改变 | 第51-53页 |
| ·化合物4a促小鼠ES细胞神经分化伴随线粒体膜电位变化 | 第53-54页 |
| ·化合物4a促小鼠ES细胞神经分化早期伴随能量代谢转变 | 第54-56页 |
| ·讨论 | 第56-57页 |
| ·小结 | 第57-58页 |
| 3. 化合物4a经由PPAR-β-Mfn2-[Ca~(2+)]_M调控线粒体能量代谢促ES细胞神经分化 | 第58-87页 |
| 引言 | 第58-60页 |
| ·仪器与材料 | 第60-61页 |
| ·仪器 | 第60页 |
| ·主要试剂及配制 | 第60-61页 |
| ·实验动物和细胞系 | 第61页 |
| ·实验方法 | 第61-69页 |
| ·小鼠ES细胞常规培养 | 第61-62页 |
| ·小鼠ES细胞体外定向分化为神经细胞培养 | 第62-63页 |
| ·形态学观察 | 第63页 |
| ·拟胚体冰冻切片 | 第63页 |
| ·免疫细胞化学法 | 第63-64页 |
| ·Western blot | 第64页 |
| ·逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法 | 第64-66页 |
| ·shRNA干扰 | 第66-67页 |
| ·FM1-43FX染色 | 第67页 |
| ·培养液中葡萄糖含量检测 | 第67页 |
| ·海马生物能量分析仪检测氧气消耗率和胞外酸化率 | 第67-68页 |
| ·线粒体Ca~(2+)浓度测定 | 第68页 |
| ·受体配体竞争性结合实验 | 第68-69页 |
| ·分子对接法模拟受体配体亲和力 | 第69页 |
| ·数据分析 | 第69页 |
| ·实验结果 | 第69-83页 |
| ·化合物4a促神经分化过程PPARs和神经特异性蛋白共叠加情况 | 第69-71页 |
| ·PPARs在化合物4a促小鼠ES神经分化过程中的时效变化 | 第71-72页 |
| ·化合物4a促神经分化过程PPAR-β靶基因ACS2转录的时效变化 | 第72页 |
| ·PPAR-β拮抗剂GSK0660抑制化合物4a促神经分化作用 | 第72-73页 |
| ·干扰PPAR-β蛋白表达对化合物4a促神经分化的影响 | 第73-76页 |
| ·干扰PPAR-β对化合物4a促神经分化早期线粒体生物合成的影响 | 第76页 |
| ·干扰PPAR-β对化合物4a促神经分化早期线粒体分裂融合和蛋白的影响 | 第76-79页 |
| ·干扰PPAR-β对化合物4a促神经分化早期线粒体能量代谢的影响 | 第79-80页 |
| ·β-catenin/TCF参与化合物4a促PPAR-β蛋白表达上调 | 第80-82页 |
| ·化合物4a促神经分化过程调节PPAR-β受体转录活性的其他方式 | 第82-83页 |
| ·讨论 | 第83-86页 |
| ·小结 | 第86-87页 |
| 参考文献 | 第87-93页 |
| 综述 | 第93-105页 |
| 参考文献 | 第102-105页 |
| 作者简历及在读期间所取得的科研成果 | 第105-107页 |
