| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-9页 |
| 1 引言 | 第9-15页 |
| ·肌肉生长抑制素的研究 | 第9-10页 |
| ·肌肉生长抑制素概述 | 第9页 |
| ·肌肉生长抑制素的研究进展 | 第9-10页 |
| ·RNA 干扰的研究 | 第10-13页 |
| ·RNAi 的发现与发展 | 第10-11页 |
| ·哺乳动物 RNA 干扰机制 | 第11页 |
| ·哺乳动物的两种 RNA 干扰类型 | 第11页 |
| ·shRNA 的设计原则 | 第11-12页 |
| ·RNA 干扰的工作机制的特点 | 第12页 |
| ·RNAi 的转染方法 | 第12-13页 |
| ·RNA 干扰技术在 MSTN 功能研究中的应用 | 第13页 |
| ·实时荧光定量 PCR 的研究 | 第13-14页 |
| ·本研究的技术路线和意义 | 第14-15页 |
| ·本研究的技术路线 | 第14页 |
| ·本研究的意义 | 第14-15页 |
| 2 实验步骤 | 第15-25页 |
| ·蒙古羊肌肉生长抑制素 cDNA 克隆 | 第15-18页 |
| ·实验主要仪器与试剂 | 第15页 |
| ·实验步骤 | 第15-18页 |
| ·pSGU6/GFP/Neo-shRNA (MSTN)干扰载体的构建 | 第18-22页 |
| ·实验仪器试剂 | 第18页 |
| ·Oligo Designer3.0 设计模板 shRNA | 第18-19页 |
| ·shRNA 模板的退火 | 第19页 |
| ·pSGU6/GFP/Neo 载体的线性化 | 第19-20页 |
| ·pSGU6/GFP/Neo-shRNA 载体的连接 | 第20页 |
| ·pSGU6/GFP/Neo-shRNA 载体的转化 | 第20-21页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第21-22页 |
| ·蒙古羊 MSTN 沉默细胞系的建立 | 第22-25页 |
| ·主要仪器、试剂与耗材 | 第22页 |
| ·G418 毒性实验 | 第22-23页 |
| ·pSGU6/GFP/Neo-shRNA 载体质粒大量提取 | 第23页 |
| ·蒙古羊成纤维细胞的转染 | 第23页 |
| ·阳性细胞克隆的药物筛选及鉴定 | 第23-25页 |
| 3 实验结果与分析 | 第25-31页 |
| ·蒙古羊 Myostatin cDNA 克隆 | 第25-26页 |
| ·PCR 扩增 Myostatin cDNA | 第25页 |
| ·阳性克隆鉴定 | 第25-26页 |
| ·蒙古羊 shRNA-MSTN 载体的构建 | 第26-28页 |
| ·pSGU6/GFP/Neo 载体线性化 | 第26-27页 |
| ·pSGU6/GFP/Neo-shRNA(MSTN)阳性重组质粒鉴定 | 第27-28页 |
| ·蒙古羊 MSTN 沉默细胞系的建立 | 第28-31页 |
| ·G418 毒性实验 | 第28页 |
| ·转染的结果 | 第28页 |
| ·shRNA(MSTN)干扰载体转染细胞单克隆的筛选 | 第28-29页 |
| ·转染细胞 Myostatin 基因表达量的检测 | 第29-31页 |
| 4 讨论 | 第31-34页 |
| ·肌肉生长抑制素 cDNA 的克隆 | 第31页 |
| ·shRNA 干扰载体的构建 | 第31-32页 |
| ·MSTN 沉默细胞的建立 | 第32-34页 |
| ·MSTN 沉默细胞系的培养 | 第32-33页 |
| ·荧光定量分析实验数据 | 第33-34页 |
| 5 结论 | 第34-35页 |
| 致谢 | 第35-36页 |
| 参考文献 | 第36-38页 |
| 附录 | 第38-41页 |
| 作者简介 | 第41页 |
