桃过敏原表达鉴定和免疫分析
| 致谢 | 第1-7页 |
| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 缩略语表 | 第11-12页 |
| 目录 | 第12-16页 |
| 1 水果过敏及过敏原的分子基础 | 第16-33页 |
| ·水果过敏的简要背景知识 | 第16-19页 |
| ·水果过敏的临床表现和流行病学调查 | 第16-18页 |
| ·水果过敏反应发生机理 | 第18-19页 |
| ·水果过敏与花粉等过敏的交叉反应 | 第19页 |
| ·主要水果过敏蛋白家族分类和特性 | 第19-26页 |
| ·过敏原的鉴定与命名 | 第19-22页 |
| ·水果过敏原蛋白家族聚类 | 第22-25页 |
| ·过敏原结构及与抗体结合表位鉴定 | 第25-26页 |
| ·过敏原基因和图谱定位 | 第26-27页 |
| ·过敏原基因在连锁图谱定位 | 第26-27页 |
| ·基因组序列物理图谱 | 第27页 |
| ·过敏原基因表达 | 第27-28页 |
| ·低过敏品种选择 | 第28-32页 |
| ·不同品种过敏性评价 | 第28-30页 |
| ·遗传多样性和与过敏性关联分析 | 第30-32页 |
| ·结语与展望 | 第32-33页 |
| 2 桃过敏原提取和LTP单抗的制备 | 第33-42页 |
| ·引言 | 第33页 |
| ·材料与方法 | 第33-36页 |
| ·试剂配制 | 第33-34页 |
| ·提取方案 | 第34-35页 |
| ·提取液配方 | 第35页 |
| ·提取物SDS-PAGE检测 | 第35-36页 |
| ·活性鉴定 | 第36页 |
| ·桃LTP鼠单克隆抗体制备 | 第36页 |
| ·结果与分析 | 第36-40页 |
| ·过敏原提取物SDS-PAGE电泳 | 第36-37页 |
| ·皮肤点刺实验 | 第37-38页 |
| ·提取物Western-blot鉴定 | 第38页 |
| ·桃LTP单抗制备 | 第38-40页 |
| ·小结 | 第40-42页 |
| ·提取液的选择 | 第40页 |
| ·桃粗提物免疫活性 | 第40-41页 |
| ·过敏原粗提物的标准化 | 第41-42页 |
| 3 桃过敏原成员基因表达分析 | 第42-56页 |
| ·引言 | 第42页 |
| ·材料与方法 | 第42-45页 |
| ·材料 | 第42-43页 |
| ·总RNA提取和cDNA合成 | 第43页 |
| ·基因特异性引物的设计 | 第43-44页 |
| ·实时荧光定量RT-PCR反应体系 | 第44页 |
| ·基因组数据挖掘 | 第44-45页 |
| ·结果与分析 | 第45-52页 |
| ·不同组织表达差异 | 第45-46页 |
| ·不同发育阶段表达差异 | 第46-47页 |
| ·不同品种间关键过敏基因表达差异 | 第47-49页 |
| ·桃基因组过敏原序列信息挖掘 | 第49-52页 |
| ·讨论 | 第52-54页 |
| ·关键桃过敏原成员 | 第52-53页 |
| ·基因型变异与低过敏品种选育 | 第53-54页 |
| ·结论 | 第54-56页 |
| 4 桃过敏原Prup1家族成员重组表达和鉴定 | 第56-77页 |
| ·引言 | 第56-57页 |
| ·材料与方法 | 第57-62页 |
| ·试剂配制 | 第57-58页 |
| ·总RNA提取与cDNA合成 | 第58页 |
| ·载体构建 | 第58-59页 |
| ·体外诱导表达和SDS-PAGE检测 | 第59-60页 |
| ·分离纯化 | 第60页 |
| ·去除组氨酸标签 | 第60-61页 |
| ·重组蛋白质鉴定 | 第61页 |
| ·不同pH下RNA水解活性和热稳定性分析 | 第61-62页 |
| ·血清IgE免疫抑制实验 | 第62页 |
| ·结果与分析 | 第62-74页 |
| ·表达载体构建 | 第62-63页 |
| ·诱导、表达及纯化 | 第63-65页 |
| ·酶解去组氨酸标签 | 第65-66页 |
| ·蛋白质鉴定及二级结构分析 | 第66-70页 |
| ·水解RNA活性和热稳定性 | 第70-71页 |
| ·患者血清IgE结合和免疫抑制 | 第71-74页 |
| ·讨论 | 第74-76页 |
| ·结论 | 第76-77页 |
| 5 桃过敏患者血清IgE分析 | 第77-86页 |
| ·引言 | 第77-78页 |
| ·患者与研究方法 | 第78-79页 |
| ·患者招募 | 第78页 |
| ·特异性IgE含量测定 | 第78-79页 |
| ·结果与分析 | 第79-83页 |
| ·临床症状 | 第79页 |
| ·过敏原提取物和各组分的sIgE含量 | 第79-83页 |
| ·讨论 | 第83-85页 |
| ·主要过敏原与地理位置差异 | 第83-84页 |
| ·交叉过敏反应 | 第84页 |
| ·不足之处 | 第84-85页 |
| ·结论 | 第85-86页 |
| 参考文献 | 第86-101页 |
| 作者简历及在学期间所取得的科研成果 | 第101-102页 |
