| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 第1章 文献综述 | 第11-18页 |
| ·病原学 | 第11-12页 |
| ·牛支原体肺炎在我国的发现 | 第12页 |
| ·牛支原体肺炎的流行现状 | 第12-13页 |
| ·牛支原体的致病特征 | 第13页 |
| ·牛支原体肺炎的诊断 | 第13-15页 |
| ·牛支原体肺炎的治疗 | 第15页 |
| ·牛支原体肺炎的疫苗研究 | 第15-16页 |
| ·牛支原体肺炎的防控 | 第16-17页 |
| ·研究目的 | 第17-18页 |
| 第2章 我国肉牛牛支原体肺炎的病原鉴定 | 第18-37页 |
| ·材料与方法 | 第18-21页 |
| ·试剂和材料 | 第18-21页 |
| ·细菌菌株 | 第18页 |
| ·载体与质粒 | 第18-19页 |
| ·主要试剂 | 第19页 |
| ·培养基与抗生素配制 | 第19-20页 |
| ·主要缓冲液与相关试剂及其配制 | 第20-21页 |
| ·实验方法 | 第21-26页 |
| ·病原的鉴定 | 第21-25页 |
| ·支原体的分离与培养 | 第21-22页 |
| ·16S rRNA序列鉴定 | 第22页 |
| ·动物人工感染实验 | 第22-24页 |
| ·牛支原体与细菌L型的异同与鉴定 | 第24-25页 |
| ·牛支原体临床分离株药敏实验 | 第25页 |
| ·其它常规细菌的分离培养 | 第25页 |
| ·泰勒虫检测 | 第25-26页 |
| ·结果与分析 | 第26-35页 |
| ·病原的鉴定 | 第26-32页 |
| ·牛支原体的分离与培养 | 第26页 |
| ·16S rRNA序列鉴定 | 第26-27页 |
| ·动物人工感染实验 | 第27-32页 |
| ·实验牛支原体与细菌L型的鉴定 | 第32页 |
| ·牛支原体临床分离株药敏实验 | 第32-34页 |
| ·其它常规细菌的分离培养 | 第34页 |
| ·泰勒虫检测 | 第34-35页 |
| ·讨论 | 第35-37页 |
| 第3章 牛支原体特异性检测方法的建立 | 第37-57页 |
| ·材料与方法 | 第37-41页 |
| ·试剂和材料 | 第37-41页 |
| ·细菌菌株 | 第37-38页 |
| ·载体与质粒 | 第38页 |
| ·主要试剂 | 第38-39页 |
| ·培养基与抗生素配制 | 第39页 |
| ·主要缓冲液与相关试剂及其配制 | 第39-41页 |
| ·实验方法 | 第41-48页 |
| ·GAPDH基因的扩增 | 第41-44页 |
| ·PCR扩增目的基因 | 第41-42页 |
| ·PCR产物回收与纯化 | 第42页 |
| ·重组表达质粒的构建 | 第42-43页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞制备(CaCl_2法) | 第43页 |
| ·热激法转化大肠杆菌DH5α感受态细胞 | 第43页 |
| ·质粒的少量制备(碱裂解法) | 第43-44页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第44页 |
| ·GAPDH的定点突变(PCR-site direct mutation,SDM) | 第44-45页 |
| ·GAPDH蛋白的表达与纯化与鉴定 | 第45-47页 |
| ·原核诱导表达的突变重组质粒 | 第45页 |
| ·原核诱导表达条件优化 | 第45-46页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第46页 |
| ·大量诱导表达与蛋白纯化 | 第46-47页 |
| ·Western-blot assay | 第47页 |
| ·GAPDH蛋白作为包被蛋白的间接ELISA检测方法的建立 | 第47-48页 |
| ·反应条件的优化 | 第47-48页 |
| ·临床样本检测 | 第48页 |
| ·实验结果 | 第48-55页 |
| ·GAPDH基因的扩增 | 第48-49页 |
| ·GAPDH的定点突变(PCR-site direct mutation,SDM) | 第49-51页 |
| ·GAPDH蛋白的表达与纯化 | 第51-54页 |
| ·原核诱导表达的突变重组质粒 | 第51页 |
| ·原核诱导表达的优化 | 第51-54页 |
| ·大量表达与纯化 | 第54页 |
| ·GAPDH蛋白作为包被蛋白的间接ELISA检测方法的建立 | 第54-55页 |
| ·反应条件的优化 | 第54-55页 |
| ·临床样本检测 | 第55页 |
| ·讨论 | 第55-57页 |
| 第4章 牛支原体灭活疫苗的研究 | 第57-65页 |
| ·前言 | 第57页 |
| ·材料与方法 | 第57-60页 |
| ·菌株 | 第57-58页 |
| ·实验试剂 | 第58页 |
| ·疫苗的制备 | 第58页 |
| ·实验动物 | 第58-59页 |
| ·免疫及攻菌方案 | 第59页 |
| ·试验动物的临床观察指标 | 第59页 |
| ·实验动物排菌与组织带菌检测 | 第59-60页 |
| ·清抗体检测 | 第60页 |
| ·病理学检测 | 第60页 |
| ·结果 | 第60-63页 |
| ·试验动物的临床症状 | 第60-61页 |
| ·实验动物排菌与组织带菌检测 | 第61-62页 |
| ·剖检动物组织病理学变化 | 第62页 |
| ·病理组织分菌情况 | 第62页 |
| ·不同阶段抗体变化规律 | 第62-63页 |
| ·分析与讨论 | 第63-65页 |
| 第5章 全文结论 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-76页 |
| 发表文献 | 第76-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
