| 摘要 | 第1-13页 |
| ABSTRACT | 第13-18页 |
| 第一章 文献综述 | 第18-30页 |
| ·围食膜的研究 | 第18-24页 |
| ·围食膜的发现及命名 | 第18-19页 |
| ·围食膜的形成 | 第19-20页 |
| ·围食膜的结构及组分 | 第20-22页 |
| ·围食膜的功能研究 | 第22-24页 |
| ·围食膜蛋白质的研究 | 第24-26页 |
| ·几丁质去乙酰化酶的研究 | 第26-30页 |
| ·菌类CDAs的研究现状 | 第26-27页 |
| ·昆虫CDAs的研究现状 | 第27-30页 |
| 第二章 引言 | 第30-34页 |
| ·研究背景 | 第30-31页 |
| ·研究的目的及意义 | 第31页 |
| ·主要研究内容 | 第31-32页 |
| ·实验技术路线 | 第32-34页 |
| 第三章 家蚕围食膜的结构及其蛋白质组成 | 第34-70页 |
| ·材料 | 第34-43页 |
| ·实验昆虫 | 第34页 |
| ·主要仪器 | 第34-35页 |
| ·主要试剂 | 第35-36页 |
| ·试剂配制 | 第36-43页 |
| ·方法 | 第43-53页 |
| ·围食膜结构观察 | 第43-44页 |
| ·围食膜蛋白质的shotgun分析 | 第44-48页 |
| ·围食膜蛋白质的双向电泳图谱构建 | 第48-51页 |
| ·RT-PCR分析 | 第51-53页 |
| ·结果与分析 | 第53-67页 |
| ·家蚕围食膜的结构观察 | 第53-55页 |
| ·家蚕围食膜蛋白质的shotgun分析 | 第55-63页 |
| ·家蚕围食膜蛋白质的双向电泳及质谱分析 | 第63-65页 |
| ·家蚕围食膜蛋白质的生物信息分析 | 第65-67页 |
| ·讨论 | 第67-70页 |
| 第四章 家蚕BmCDA7基因的全长克隆及序列分析 | 第70-88页 |
| ·材料和方法 | 第70-77页 |
| ·材料 | 第70页 |
| ·试剂 | 第70-71页 |
| ·仪器 | 第71页 |
| ·主要溶液的配制 | 第71-72页 |
| ·实验方法与步骤 | 第72-77页 |
| ·结果与分析 | 第77-84页 |
| ·BmCDA7的全长克隆 | 第77页 |
| ·BmCDA7基因及蛋白质的结构分析 | 第77-79页 |
| ·家蚕CDAs的鉴定及序列分析 | 第79-80页 |
| ·BmCDA7的系统进化关系 | 第80-83页 |
| ·BmCDA7的表达模式分析 | 第83-84页 |
| ·讨论 | 第84-88页 |
| 第五章 家蚕BmCDA7基因的原核表达及组织定位 | 第88-102页 |
| ·实验材料 | 第88-91页 |
| ·主要试剂和耗材 | 第88页 |
| ·主要试剂配制 | 第88-91页 |
| ·主要仪器设备 | 第91页 |
| ·实验方法 | 第91-96页 |
| ·RNA提取、检测与cDNA制备 | 第91页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第91-93页 |
| ·重组蛋白质的原核表达 | 第93-94页 |
| ·蛋白质纯化 | 第94页 |
| ·蛋白质定量 | 第94-95页 |
| ·抗体制备 | 第95页 |
| ·Western Blotting | 第95-96页 |
| ·结果与分析 | 第96-99页 |
| ·BmCDA7原核表达载体构建 | 第96-97页 |
| ·BmCDA7重组蛋白原核表达检测 | 第97页 |
| ·BmCDA7重组蛋白纯化及抗体制备 | 第97-99页 |
| ·Western Blotting | 第99页 |
| ·讨论 | 第99-102页 |
| 第六章 家蚕BmCDA7基因的真核表达及其蛋白酶活测定 | 第102-112页 |
| ·材料 | 第102-104页 |
| ·菌株和试剂 | 第102页 |
| ·主要仪器 | 第102页 |
| ·主要培养基和缓冲液 | 第102-104页 |
| ·方法 | 第104-108页 |
| ·真核表达引物设计及克隆 | 第104页 |
| ·毕赤酵母表达载体的构建 | 第104页 |
| ·毕氏酵母的转化 | 第104-106页 |
| ·酵母转化子的G418筛选 | 第106页 |
| ·酵母转化子的表型分析 | 第106页 |
| ·表达分析 | 第106-107页 |
| ·硫酸铵纯化 | 第107页 |
| ·酶活测定 | 第107-108页 |
| ·结果与分析 | 第108-111页 |
| ·BmCDA7基因的克隆 | 第108页 |
| ·真核表达载体的构建及鉴定 | 第108-109页 |
| ·BmCDA7基因的真核表达检测 | 第109-110页 |
| ·BmCDA7重组蛋白的粗酶活性测定 | 第110-111页 |
| ·讨论 | 第111-112页 |
| 第七章 家蚕BmCDA 7基因的功能研究 | 第112-130页 |
| ·材料与方法 | 第112-115页 |
| ·蚕品种 | 第112页 |
| ·仪器与试剂 | 第112-114页 |
| ·主要溶液及配制 | 第114-115页 |
| ·方法 | 第115-121页 |
| ·转基因载体的构建 | 第115-116页 |
| ·显微注射与荧光筛选 | 第116页 |
| ·转基因阳性个体的PCR检测 | 第116页 |
| ·Southern分析 | 第116-117页 |
| ·反向PCR(Inverse PCR) | 第117-119页 |
| ·Western blotting检测 | 第119页 |
| ·围食膜通透性 | 第119页 |
| ·电镜观察 | 第119页 |
| ·几丁质含量测定 | 第119-121页 |
| ·结果与分析 | 第121-128页 |
| ·转基因载体的构建 | 第121-122页 |
| ·阳性筛选及鉴定 | 第122-124页 |
| ·转基因拷贝数检测 | 第124页 |
| ·转基因插入位点鉴定 | 第124-125页 |
| ·围食膜通透性 | 第125-126页 |
| ·围食膜的结构 | 第126-127页 |
| ·围食膜几丁质含量 | 第127-128页 |
| ·讨论 | 第128-130页 |
| 第八章 综合与结论 | 第130-134页 |
| ·家蚕围食膜的结构及其蛋白质组成 | 第130页 |
| ·家香基因的全长克隆及序列分析 | 第130-131页 |
| ·家香基因的原核表达及组织定位 | 第131页 |
| ·家香基因的真核表达及其蛋白酶活测定 | 第131页 |
| ·家香基因的功能研究 | 第131-134页 |
| 论文创新点 | 第134-136页 |
| 参考文献 | 第136-144页 |
| 在读期间发表论文及参与课题 | 第144-146页 |
| 致谢 | 第146-147页 |