| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 1 引言 | 第12-26页 |
| ·抗菌肽的研究进展 | 第12-18页 |
| ·抗菌肽的分类及特点 | 第13-14页 |
| ·抗菌肽的抗菌机制研究 | 第14-16页 |
| ·影响抗菌肽生物活性因素 | 第16-18页 |
| ·防御素的研究进展 | 第18-23页 |
| ·防御素的分类与结构特征 | 第18-19页 |
| ·禽β-防御素研究进展 | 第19-23页 |
| ·Toll样受体研究进展 | 第23-24页 |
| ·研究目的与意义 | 第24-26页 |
| 2 材料和方法 | 第26-43页 |
| ·材料 | 第26-28页 |
| ·菌种及质粒 | 第26页 |
| ·药品、试剂及配制 | 第26-27页 |
| ·主要仪器 | 第27页 |
| ·实验动物 | 第27-28页 |
| ·实验动物样品采集 | 第28页 |
| ·鹅β-防御素基因的克隆及分析 | 第28-30页 |
| ·鹅脾脏、骨髓、法氏囊组织总RNA提取 | 第28页 |
| ·反转录(RT) | 第28-29页 |
| ·聚合酶链式反应(PCR) | 第29-30页 |
| ·鹅β-防御素基因克隆载体的扩建 | 第30-33页 |
| ·PCR产物的回收 | 第30页 |
| ·PCR产物的连接 | 第30页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第30-31页 |
| ·连接产物的转化 | 第31页 |
| ·碱裂解法粗提质粒进行重组质粒筛选 | 第31-32页 |
| ·重组质粒的PCR鉴定与测序 | 第32页 |
| ·AvBDs基因的遗传进化分析 | 第32-33页 |
| ·重组鹅AvBD 1、3、6蛋白的原核表达 | 第33-38页 |
| ·原核表达载体的构建与测序 | 第33-36页 |
| ·重组鹅AvBD1、3、6融合蛋白诱导表达 | 第36-37页 |
| ·融合蛋白的纯化 | 第37-38页 |
| ·鹅AvBD1、3、6蛋白的合成 | 第38页 |
| ·重组与合成鹅AvBD1、3、6蛋白的抗菌活性测定 | 第38页 |
| ·盐浓度变化对重组与合成鹅AvBD1、3、6蛋白抗菌活性的影响 | 第38页 |
| ·重组与合成鹅AvBD1、3、6蛋白溶血试验 | 第38-39页 |
| ·感染沙门氏菌试验 | 第39-43页 |
| ·沙门氏菌的培养 | 第39页 |
| ·试验分组、攻菌及样品的制备 | 第39页 |
| ·荧光定PCR检测 | 第39-42页 |
| ·鹅AvBD1、3、6基因检测 | 第42页 |
| ·鹅细胞因子和Toll样受体基因检测 | 第42页 |
| ·数据统计分析 | 第42-43页 |
| 3 结果与分析 | 第43-65页 |
| ·鹅AvBD1、3、6 mRNA的RT-PCR扩增 | 第43-44页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第44页 |
| ·测序结果及分析 | 第44-46页 |
| ·鹅AvBD1、3、6基因的遗传进化分析 | 第46-48页 |
| ·重组鹅AvBD1、3、6蛋白的原核表达 | 第48-51页 |
| ·表达用重组表达质粒pMD18-T-Goose AvBD1、3、6的鉴定 | 第48-49页 |
| ·重组表达质粒pGEX-goose AvBD1、3、6的鉴定 | 第49-50页 |
| ·重组鹅AvBD1、3和6蛋白的原核表达与纯化 | 第50-51页 |
| ·重组与合成鹅AvBD 1、3、6及GST标签蛋白的抗菌活性 | 第51-54页 |
| ·重组与合成鹅AvBD 1、3、6蛋白对不同盐浓度的稳定性 | 第54-56页 |
| ·重组与合成鹅AvBD1、3、6蛋白对血红胞的稳定性 | 第56-57页 |
| ·感染沙门氏菌前后鹅AvBD1、3、6基因在组织器官中表达差异 | 第57-61页 |
| ·感染沙门氏菌前后鹅细胞因子和Toll样受体基因在组织器官中表达差异 | 第61-65页 |
| 4 讨论 | 第65-70页 |
| ·鹅AvBD1、3、6基因克隆与遗传进化分析 | 第65-66页 |
| ·重组鹅AvBD1、3、6融合蛋白的原核表达 | 第66页 |
| ·重组与合成鹅AvBD1、3、6蛋白的生物学特性 | 第66-67页 |
| ·鹅β-防御素抗菌感染机制研究 | 第67-70页 |
| 5 结论 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-81页 |
| 附录 | 第81-83页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第83页 |
