| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-11页 |
| 前言 | 第11-19页 |
| 1. 牛瑟氏泰勒虫的分类学地位及命名 | 第11-12页 |
| 2 牛瑟氏泰勒虫功能基因的研究 | 第12-16页 |
| ·牛瑟氏泰勒虫主要表面蛋白(MPSP)基因的研究 | 第12-14页 |
| ·牛瑟氏泰勒虫18S rRNA基因的研究 | 第14-15页 |
| ·牛瑟氏泰勒虫ITS基因的研究 | 第15页 |
| ·牛瑟氏泰勒虫其他基因的研究 | 第15-16页 |
| 3 牛瑟氏泰勒虫MPSP基因多样性的研究 | 第16页 |
| 4 牛瑟氏泰勒虫可能的免疫逃避机制 | 第16-17页 |
| 5 牛瑟氏泰勒虫多表位疫苗的研究 | 第17页 |
| 6 本研究的目的与意义 | 第17-19页 |
| 试验研究 | 第19-47页 |
| 1 材料 | 第19-23页 |
| ·牛瑟氏泰勒虫阳性血液和血清 | 第19页 |
| ·试剂、载体和菌种 | 第19页 |
| ·主要试剂的配制 | 第19-21页 |
| ·引物的设计与合成 | 第21页 |
| ·主要仪器 | 第21-23页 |
| 2 方法 | 第23-32页 |
| ·牛瑟氏泰勒虫MPSP基因双T细胞表位的原核表达 | 第23-27页 |
| ·牛瑟氏泰勒虫基因组DNA的提取 | 第23页 |
| ·目的基因的扩增和融合拼接 | 第23页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第23-24页 |
| ·融合双表位基因的连接和转化 | 第24页 |
| ·重组质粒的提取 | 第24页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第24-25页 |
| ·原核重组表达质粒的构建 | 第25页 |
| ·原核重组表达质粒的鉴定和测序 | 第25页 |
| ·重组表达质粒的诱导表达 | 第25-26页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE电泳 | 第26页 |
| ·表达产物的Western blot分析 | 第26-27页 |
| ·牛瑟氏泰勒虫MPSP基因双T细胞表位的真核表达 | 第27-28页 |
| ·真核表达融合基因的扩增 | 第27页 |
| ·真核重组表达质粒的构建及鉴定 | 第27页 |
| ·真核表达质粒转染Vero细胞 | 第27页 |
| ·RT-PCR鉴定 | 第27-28页 |
| ·间接免疫荧光检测 | 第28页 |
| ·免疫BALB/c小鼠 | 第28-32页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第28-29页 |
| ·重组表达质粒的大量提取 | 第29页 |
| ·动物免疫 | 第29-30页 |
| ·免疫小鼠IgG抗体水平的检测(间节ELISA法) | 第30页 |
| ·免疫小鼠细胞因子IFN-γ和IL-4的测定 | 第30-31页 |
| ·数据分析 | 第31-32页 |
| 3 结果 | 第32-43页 |
| ·牛瑟氏泰勒虫MPSP基因双T细胞表位的原核表达 | 第32-36页 |
| ·PCR扩增结果 | 第32-33页 |
| ·目的基因的克隆及鉴定 | 第33-34页 |
| ·目的基因的测序及序列分析 | 第34页 |
| ·原核重组表达质粒的构建及鉴定 | 第34-35页 |
| ·SDS-PAGE电泳分析表达产物的大小 | 第35-36页 |
| ·Western blot分析表达蛋白的反应原性 | 第36页 |
| ·牛瑟氏泰勒虫MPSP基因双T细胞表位的真核表达 | 第36-39页 |
| ·目的基因的扩增、克隆及鉴定 | 第36-37页 |
| ·真核重组表达质粒的构建及鉴定 | 第37-38页 |
| ·RT-PCR检测重组质粒在Vero细胞中表达 | 第38页 |
| ·IFAT检测pVAX1-E’1-E’2在Vero细胞中的瞬时表达 | 第38-39页 |
| ·动物免疫 | 第39-43页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第39页 |
| ·免疫小鼠IgG抗体水平的检测(间接ELISA法) | 第39-40页 |
| ·免疫小鼠细胞因子IFN-γ的测定 | 第40-41页 |
| ·免疫小鼠细胞因子IL-4的测定 | 第41-43页 |
| 4 讨论 | 第43-46页 |
| 5 结论 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
| 个人简介 | 第55-56页 |
| 在研期间发表的论文 | 第56页 |
