| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-13页 |
| 文献综述 | 第13-24页 |
| 第一章 基因打靶及RNA 干扰技术和转基因动物研究进展 | 第13-22页 |
| ·基因打靶技术简介 | 第13-16页 |
| ·基因打靶的原理 | 第13页 |
| ·打靶载体的应用简介 | 第13-15页 |
| ·几种提高重组效率的策略 | 第15-16页 |
| ·RNA 干扰技术简介 | 第16-17页 |
| ·RNA 干扰技术原理 | 第16页 |
| ·RNAi 的作用机制 | 第16-17页 |
| ·RNAi 技术在抗病毒研究中的应用 | 第17页 |
| ·转基因动物研究进展 | 第17-22页 |
| ·转基因动物概述 | 第17-18页 |
| ·动物转基因技术的简介与发展 | 第18-20页 |
| ·转基因技术在猪上的应用和发展 | 第20-22页 |
| 第二章 分子伴侣JIV90 基因及CSFV 3'-UTR 的功能 | 第22-24页 |
| ·猪瘟病毒简介 | 第22页 |
| ·JIV90 基因功能简介 | 第22-23页 |
| ·CSFV 3'-UTR 的功能 | 第23-24页 |
| 试验研究 | 第24-53页 |
| 第三章 分子伴侣JIV90 基因真核细胞打靶载体的构建 | 第24-36页 |
| ·材料 | 第25-26页 |
| ·材料和常用试剂 | 第25页 |
| ·主要仪器 | 第25页 |
| ·主要试剂的配制 | 第25-26页 |
| ·方法与步骤 | 第26-30页 |
| ·全基因组DNA 的制备 | 第26页 |
| ·打靶载体JKS 的构建 | 第26-30页 |
| ·试验结果 | 第30-34页 |
| ·猪Jiv90 基因同源臂的扩增及鉴定结果 | 第30页 |
| ·5'同源臂和3'同源臂的PCR 初次扩增结果 | 第30-31页 |
| ·具有酶切位点的5'同源臂和3'同源臂的PCR 扩增结果 | 第31页 |
| ·同源臂连接载体pEASY-T1 的酶切结果 | 第31-32页 |
| ·pA2Tpsp 重组质粒检测结果 | 第32-33页 |
| ·JKS 重组质粒检测结果 | 第33页 |
| ·打靶载体JKS 构建图 | 第33-34页 |
| ·讨论 | 第34-35页 |
| ·小结 | 第35-36页 |
| 第四章 打靶载体JKS 转染SUVEC | 第36-45页 |
| ·材料 | 第37-38页 |
| ·病毒、载体和细胞转染相关试剂 | 第37页 |
| ·主要器材 | 第37页 |
| ·主要试剂的配制 | 第37-38页 |
| ·方法 | 第38-40页 |
| ·SUVEC 的传代培养 | 第38页 |
| ·SUVEC 的细胞冻存 | 第38页 |
| ·SUVEC 的细胞复苏 | 第38页 |
| ·SUVEC 的G418 最佳筛选浓度度确定 | 第38页 |
| ·打靶载体JKS 转染SUVEC 细胞 | 第38-39页 |
| ·基因整合PCR 检测 | 第39页 |
| ·转染JKS 载体细胞筛选后接毒试验 | 第39页 |
| ·总RNA 的提取及质量鉴定 | 第39-40页 |
| ·Real-time PCR 检测 | 第40页 |
| ·试验结果 | 第40-43页 |
| ·猪Jiv90 基因同源打靶载体JKS 转染细胞的结果 | 第40-41页 |
| ·转染后的neo 基因检测结果 | 第41页 |
| ·总RNA 的琼脂糖凝胶电泳检测结果 | 第41-42页 |
| ·接毒后细胞的实时定量PCR 检测结果 | 第42-43页 |
| ·讨论 | 第43页 |
| ·小结 | 第43-45页 |
| 第五章 针对CSFV 基因组3'-UTR SHRNA 细胞株筛选和病毒检测 | 第45-53页 |
| ·材料 | 第45-46页 |
| ·病毒、细胞和载体 | 第45页 |
| ·主要试剂 | 第45页 |
| ·仪器和器材 | 第45-46页 |
| ·方法与步骤 | 第46-47页 |
| ·针对3'-UTR 区基因的序列分析及三个靶点的shRNA 的化学合成 | 第46页 |
| ·骨架载体pGPU6/GFP/Neo | 第46页 |
| ·针对CSFV 的3'-UTR 区的shRNA 的载体构建. | 第46页 |
| ·干扰载体转染PK-15 细胞和SIEC 细胞. | 第46页 |
| ·G418 筛选及阳性细胞的富集 | 第46-47页 |
| ·筛选细胞的接毒试验和Real-time PCR 检测 | 第47页 |
| ·结果 | 第47-51页 |
| ·干扰序列设计结果 | 第47页 |
| ·合成的DNA 序列 | 第47页 |
| ·干扰载体测序结果 | 第47-49页 |
| ·G418 筛选的最佳浓度和筛选细胞系结果 | 第49-50页 |
| ·Real-time PCR 检测结果 | 第50-51页 |
| ·讨论 | 第51-52页 |
| ·小结 | 第52-53页 |
| 结论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 作者简介 | 第61页 |
