| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-13页 |
| 縮略语表 | 第13-14页 |
| 1. 文献综述 | 第14-33页 |
| ·苏云金芽胞杆菌简介 | 第14-15页 |
| ·苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白 | 第15-22页 |
| ·杀虫晶体蛋白命名与分类 | 第15-17页 |
| ·Cry类杀虫晶体蛋白性质 | 第17页 |
| ·Cry杀虫晶体蛋白结构 | 第17-20页 |
| ·杀虫晶体蛋白毒性机理 | 第20-21页 |
| ·昆虫抗性与杀虫晶体蛋白受体之间关系 | 第21-22页 |
| ·杀虫晶体蛋白Cry9Ca1性质 | 第22页 |
| ·苏云金芽胞杆菌营养期杀虫蛋白 | 第22-25页 |
| ·苏云金芽胞杆菌营养期杀虫蛋白分类 | 第22-23页 |
| ·苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白Vip3A结构与性质 | 第23-24页 |
| ·苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白Vip3A毒性机理 | 第24-25页 |
| ·苏云金芽胞杆菌营养期杀虫蛋白Vip3Aa7性质 | 第25页 |
| ·融合杀虫蛋白 | 第25-28页 |
| ·多价杀虫蛋白的日的与优势 | 第25-26页 |
| ·双价杀虫基因在转基因领域的应用方式 | 第26-27页 |
| ·目前发明的抗虫多价融合蛋白 | 第27-28页 |
| ·苏云金芽胞杆菌杀虫蛋白毒力与溶解度的关系 | 第28-29页 |
| ·杀虫晶体蛋白毒力与溶解度关系 | 第28页 |
| ·营养期杀虫蛋白Vip3A毒力与溶解度关系 | 第28-29页 |
| ·转基因抗虫植物 | 第29-32页 |
| ·转基因是防治虫害的发展趋势 | 第29-31页 |
| ·当前我国转基因研究实例 | 第31-32页 |
| ·研究目的意义 | 第32-33页 |
| 2 材料方法 | 第33-46页 |
| ·实验材料 | 第33-39页 |
| ·菌株与质粒 | 第33-36页 |
| ·引物序列 | 第36-38页 |
| ·培养基,抗生素及其培养条件 | 第38页 |
| ·试剂与器材 | 第38-39页 |
| ·供试昆虫 | 第39页 |
| ·试验方法 | 第39-46页 |
| ·常规DNA操作 | 第39-41页 |
| ·定点突变 | 第41-42页 |
| ·蛋白异源表达,蛋白酶消化,SDS-PAGE及蛋白定量 | 第42-44页 |
| ·异源表达杀虫蛋白包涵体的显微镜观察 | 第44页 |
| ·杀虫蛋白毒力的生物测定 | 第44-45页 |
| ·杀虫蛋白半致死浓度LC_(50)和协同系数的计算 | 第45-46页 |
| 3 结果与分析 | 第46-85页 |
| ·单双价杀虫蛋白植物表达载体的构建 | 第46-62页 |
| ·pCPANV3AC2A双价嵌合植物表达载体构建 | 第46-51页 |
| ·pCPANV3AC1C双价植物表达载体的构建 | 第51-55页 |
| ·pCPANC1C,pCPANC2A单价植物表达载体的构建 | 第55-57页 |
| ·pCPANEK通用植物表达载体的构建 | 第57-60页 |
| ·pCPANEK通用植物表达载体特点和使用 | 第60-62页 |
| ·单价,双价融合蛋白的构建,异源表达以及毒力分析 | 第62-74页 |
| ·Cry1Ca,Cry2Aa,Cry9Ca,Vip3Aa7单价蛋白大肠杆菌原核表达载体的构建 | 第62-63页 |
| ·V3AC1C,V3AC2A,V3AC9C双价嵌合蛋白大肠杆菌原核表达载体的构建 | 第63-64页 |
| ·单双价蛋白的表达 | 第64-68页 |
| ·杀虫蛋白异源表达包涵体的镜检 | 第68-69页 |
| ·杀虫蛋白的胰蛋白酶消化 | 第69-72页 |
| ·生物测定各杀虫蛋白毒力 | 第72-74页 |
| ·苏云金芽胞杆菌营养期杀虫蛋白Vip3Aa7半胱氨酸突变体的毒力变化分析 | 第74-85页 |
| ·Vip3Aa7蛋白的生物信息学分析 | 第75-77页 |
| ·Vip3Aa7半胱氨酸残基定点突变及突变体的载体构建 | 第77-78页 |
| ·Vip3Aa7半胱氨酸突变体蛋白的表达与溶解度分析 | 第78-80页 |
| ·Vip3Aa7半胱氨酸突变体蛋白毒力的生物测定 | 第80页 |
| ·胰蛋白酶对Vip3Aa7半胱氨酸突变体蛋白的消化测定 | 第80-85页 |
| 4 结论与讨论 | 第85-89页 |
| ·嵌合蛋白构建方式的研究和定点突变 | 第85页 |
| ·嵌合蛋白构建植物表达载体相对于传统双价载体的优势 | 第85-86页 |
| ·嵌合蛋白被胰蛋白酶消化的研究 | 第86-87页 |
| ·嵌合蛋白高毒力的分析 | 第87页 |
| ·突变半胱氨酸对改造苏云金芽胞杆菌毒力的探讨 | 第87-89页 |
| 参考文献 | 第89-96页 |
| 已发表和待发表的论文 | 第96-97页 |
| 致谢 | 第97页 |
