| 中文摘要 | 第1-8页 |
| 英文摘要 | 第8-10页 |
| 英文缩写 | 第10-11页 |
| 1 文献综述 | 第11-26页 |
| 1．1 家蚕性别控制的研究进展 | 第11-18页 |
| 1．1．1 蚕的自然单性生殖 | 第11-12页 |
| 1．1．2 环境条件诱发家蚕单性生殖 | 第12-13页 |
| 1．1．2．1 雄性化的单性生殖 | 第12-13页 |
| 1．1．2．2 雄核发育 | 第13页 |
| 1．1．3 利用形态标记鉴别雌雄 | 第13-14页 |
| 1．1．3．1 斑纹限性系统 | 第13-14页 |
| 1．1．3．2 限性蚁色系 | 第14页 |
| 1．1．3．3 限性卵色系 | 第14页 |
| 1．1．4 基因作用控制性别 | 第14-16页 |
| 1．1．4．1 伴性平衡致死系统 | 第15-16页 |
| 1．1．4．2 非性连锁平衡致死系 | 第16页 |
| 1．1．5 环境与基因互作控制性别 | 第16-18页 |
| 1．2 差异表达基因（片段）的分离策略 | 第18-24页 |
| 1．2．1 mRNA差异显示技术 | 第18-20页 |
| 1．2．2 差减杂交 | 第20-21页 |
| 1．2．3 代表性差异分析、酶降解差减杂交和接头捕获差减杂交 | 第21-22页 |
| 1．2．4 抑制性差减杂交 | 第22页 |
| 1．2．5 基因表达指纹、cDNA 3’末端限制酶切片段显示法、基因表达连续分析法、标签接头竞争PCR技术、扩增酶切片段多态性 | 第22-24页 |
| 1．3 mRNA差异显示技术应用的研究进展 | 第24-26页 |
| 1．3．1 肿瘤和疾病相关基因研究 | 第24页 |
| 1．3．2 生物体对外因刺激反应的研究 | 第24页 |
| 1．3．3 杂种优势机理研究 | 第24页 |
| 1．3．4 发育机理研究 | 第24-25页 |
| 1．3．5 DDRT-PCR技术在家蚕上的应用 | 第25-26页 |
| 2 前言 | 第26-28页 |
| 2．1 研究背景及研究意义 | 第26-27页 |
| 2．2 技术路线 | 第27-28页 |
| 3 材料与方法 | 第28-39页 |
| 3．1 供试材料、试剂和设备 | 第28-30页 |
| 3．1．1 试验材料 | 第28页 |
| 3．1．1．1 试验用蚕品种 | 第28页 |
| 3．1．1．2 载体及宿主菌 | 第28页 |
| 3．1．2 主要试剂 | 第28页 |
| 3．1．3 主要仪器与设备 | 第28-29页 |
| 3．1．4 部分试剂配制 | 第29-30页 |
| 3．1．4．1 RNA提取用试剂 | 第29页 |
| 3．1．4．2 反转录反应及PCR反应所用引物 | 第29页 |
| 3．1．4．3 测序胶电泳所用试剂 | 第29页 |
| 3．1．4．4 地高辛标记Northern杂交缓冲液系列 | 第29-30页 |
| 3．1．4．5 克隆所需试剂 | 第30页 |
| 3．2 方法 | 第30-39页 |
| 3．2．1 蚕种的催青处理设置及取样 | 第30-31页 |
| 3．2．2 蚕卵总RNA的提取 | 第31页 |
| 3．2．3 总RNA样品中DNA的去除 | 第31-32页 |
| 3．2．4 反转录反应（第一链cDNA合成） | 第32页 |
| 3．2．5 PCR扩增反应（双链cDNA的合成） | 第32页 |
| 3．2．6 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳PCR产物 | 第32-33页 |
| 3．2．6．1 测序胶电冰（6％变性PAG） | 第32-33页 |
| 3．2．6．2 非放射性的银染法 | 第33页 |
| 3．2．7 cDNA目的片段的回收及探针的再扩增 | 第33页 |
| 3．2．8 再扩增目的片段的琼脂糖电泳及回收 | 第33-34页 |
| 3．2．9 Northern Blot检测 | 第34-36页 |
| 3．2．9．1 标记DNA探针 | 第34页 |
| 3．2．9．2 标记效率检测 | 第34-35页 |
| 3．2．9．3 RNA变性凝胶电泳 | 第35页 |
| 3．2．9．4 转印及构筑转印平台 | 第35页 |
| 3．2．9．5 杂交（在杂交炉中进行） | 第35-36页 |
| 3．2．9．6 洗膜（在杂交炉中进行） | 第36页 |
| 3．2．9．7 显色 | 第36页 |
| 3．2．10 特异片段的克隆 | 第36-38页 |
| 3．2．10．1 质粒载体的制备 | 第36页 |
| 3．2．10．2 外源片段的准备：见3．2．8 | 第36页 |
| 3．2．10．3 目的片段与载体的连接 | 第36页 |
| 3．2．10．4 感受态细胞的制备 | 第36-37页 |
| 3．2．10．5 转化 | 第37页 |
| 3．2．10．6 阳性克隆的筛选及验证 | 第37-38页 |
| 3．2．11 测序 | 第38页 |
| 3．2．12 序列分析 | 第38-39页 |
| 4 结果与分析 | 第39-49页 |
| 4．1 两种不同的催青处理对夏sch等蚕品种孵化的影响 | 第39页 |
| 4．2 总RNA的提取及DNA杂质的去除 | 第39-41页 |
| 4．3 不同催青处理蚕卵的mRNA差别显示 | 第41-44页 |
| 4．4 特异cDNA片段的二次扩增 | 第44页 |
| 4．5 差异片段的Northern杂交鉴定 | 第44-45页 |
| 4．6 差异片段的克隆 | 第45-46页 |
| 4．7 特异cDNA的序列分析 | 第46-49页 |
| 5 讨论 | 第49-56页 |
| 5．1 选择正确材料是应用DDRT-PCR技术的关键 | 第49-50页 |
| 5．2 引物设计 | 第50页 |
| 5．3 所用实验技术特点 | 第50-52页 |
| 5．3．1 总RNA作为模板及其处理 | 第50-51页 |
| 5．3．2 DDRT-PCR优化体系的建立 | 第51-52页 |
| 5．4 差异HAP_8280与sch蚕胚胎期温敏性的相关性论证 | 第52-53页 |
| 5．5 存在的问题及其解决方法 | 第53-55页 |
| 5．5．1 存在的问题 | 第53页 |
| 5．5．2 解决上述问题的可能方法 | 第53-55页 |
| 5．6 展望 | 第55-56页 |
| 6 小结 | 第56-58页 |
| 参考文献 | 第58-63页 |
| 附录 | 第63-69页 |
| 致谢 | 第69页 |
